前言：NK细胞结合器（NK Cell Engagers，NKCE）和T细胞结合（T Cell Engagers, TCE）的第一性原理是一样的。
都通过一段具有特异性识别的蛋白，把肿瘤细胞和免疫细胞拉在一起，形成免疫突触，激活免疫细胞，从而杀掉肿瘤细胞。
在进行药物设计时，相同的是肿瘤相关靶点，不同的是TCE靶向T细胞常用anti-CD3，而靶向NK细胞的靶点就非常多了。
1、CD16a
CD16a，也称为FcγRIIIa（Fc受体，可参考《清晰！FcR的系统梳理！》），在CD56dim NK细胞中大量表达的激活受体，它锚定在NK细胞膜上，并与CD3ζ和/或FcεRIγ链相关。
与IgG抗体Fc结合后，CD16a分子发生聚集，导致CD3ζ和/或FcεRIγ的ITAM基序的酪氨酸残基被Src家族激酶磷酸化。随后，在NK细胞中触发信号级联反应，激活NK细胞。
CD16a具有非常独特的特点：它不需要其它额外受体的共同结合就能实现对NK细胞的最佳激活。
这一点非常重要，以T细胞结合器为例，某些双特异性T细胞接合器（BiTE），需要共刺激受体CD28的接合才能完全激活T细胞。
也因此，CD16a是NKCE开发最受欢迎的靶点!
目前许多靶向CD16a产品处于临床前或临床试验中，最有名的公司是Affimed，进展最快的管线AFM13就是一种靶向CD16a的NKCE。
AMF13分子量为110 kDa，结构是由串联同二聚体组成的四价的双特异性抗CD30xCD16a，该药物是抗CD30和CD16a抗体的Fv重链和轻链结构域通过9个氨基酸的Linker构建的。
临床试验表明，AMF13 可有效治疗复发或难治性霍奇金淋巴瘤患者，并且在持续治疗期间耐受性良好。随着 AFM13 的有效性得到证实，具有相似结构的NKCEs也被开发出来分别靶向EGFR vIII（AFM22）、EGFR（AFM24）和BCMA（AFM26）。
CD16a在被激活后，会迅速从NK细胞中裂解。CD16a的下调可以促进NK细胞在细胞溶解后脱离，从而能够参与下一个靶细胞的降解。不过，这个过程也可能会使靶向CD16a的NKCE效果降低。
另外，中性粒细胞的膜结合CD16b受体胞外结构域与CD16a结构域非常相似，靶向CD16a可能引起中心粒细胞的过度活化。而且血清中也存在可溶性CD16，主要是中性粒细胞表面脱落的CD16b和从NK细胞脱落的少量CD16a，这可能与竞争结合NKCEs，从而大大降低其有效性。
2、NKG2D
NKG2D是一种二硫键连接的同二聚体C型凝集素样受体，在NK细胞、NKT细胞、CD8+ T细胞亚群和γδT细胞亚群中表达。其胞内域缺乏ITAM，但与一种称为DAP10的接头蛋白结合。
DAP10的尾部包含一个基于酪氨酸的YxxM基序。在Src家族激酶磷酸化酪氨酸后，DAP10诱导PI3K和Grb2/Vav1/PLCγ信号转导复合体的募集和激活，从而激活NK细胞。
NKG2D介导的肿瘤细胞杀伤比CD16a介导的肿瘤细胞杀伤更快，但其激活强度相对较弱。此外，在缺乏NKG2D配体的肿瘤中，NK细胞的运动能力更差，这表明靶向阻断肿瘤中NKG2D 配体可能有助于将肿瘤浸润的NK细胞保留在肿瘤内。
3、Nkp30
Nkp30是一种Ig样跨膜蛋白，具有单个V型胞外结构域，在静息和活化的NK细胞中组成型表达。与CD16a类似，Nkp30也通过和CD3ζ和/或 FcεRIγ链的二硫键连接完成胞内信号转导。
Nkp30在被接合时触发NK细胞脱颗粒和细胞因子释放，与CD16a不同的是Nkp30在NK激活后不会迅速降解，使其成为比CD16a更有希望获得疗效和持久性的靶标。
目前，Compass therapeutics的药物CTX-4419（靶向BCMA）已经公布了其临床前的数据，表现出了优秀抗MM肿瘤效果。
CTX-4419的结构为两个抗Nkp30的Fab片段连接在抗BCMA IgG1 抗体重链的C端。
不过当Nkp30用作NCKE开发的靶标时，Nkp30的较低表达量可能是一个问题。研究表明，每个NK细胞表面大约1000个Nkp30分子，远低于 CD16a的密度（~7万个）。
4、Nkp46
Nkp46是与Nkp30具有许多相似特征的NK激活蛋白。但Nkp46具有两个细胞外C型Ig结构域，而Nkp30只有一个Ig结构域。
单独结合Nkp46仅微弱激活NK细胞，与其他激活受体（如2B4、DNAM1或CD2）共同结合可显著增强NK细胞活化。
Nkp46在多种癌症（包括肺癌、急性髓性白血病和乳腺癌）的肿瘤浸润 NK细胞中表达，因此有望成为NKCE开发的靶标。
Cytovia therapeutics的四价Nkp46xCD38（CYT-338）正在开发中。CYT-338具有IgG1骨架，其Fc区介导NK细胞ADCC，Fab区域识别 Nkp46，靶向肿瘤抗原CD38的Fab片段对称地附着在IgG骨架重链的N 端（FLEX-NK）。在IgG的恒定区引入突变，以最大限度地减少重链和轻链的错配。
CYT-338与MM细胞系的结合比Daratumumab 高3倍，并且显示出更强的剂量依赖性。
5、Nkp80
Nkp80又称为KLRF1，是一种类似于NKG2D的同型二聚体C型凝集素样受体，它主要在NK细胞中表达。
Nkp80的胞浆尾部带有一个半ITAM 样序列（YxxL），结合后，该序列与Lck和Syk结合。Nkp80唯一已知的天然配体是C型凝集素（AICL）。
然而，相对较低的表面表达Nkp80（每个NK细胞约5000个）可能需要一些特殊的NKCE设计考虑，如增强灵活性和多价，以提高靶向Nkp80 的功效。
6、NKG2C
NKG2C，也称CD159a，是一种特异性识别HLA-E的激活受体。它与 CD94形成异二聚体，并通过其跨膜结构域中带正电荷的残基与DAP-12 结合。
NKG2C主要在缺乏NKG2A的成熟NK细胞中表达，其表达增加表示“记忆”NK 细胞表型。
与CD16a类似，NKG2C可以单独激活NK细胞。不过NKG2C在激活NK 细胞后不会迅速降解，使其成为 NKCE开发的有前途的候选者。
然而，与CD16a相比，NKG2C的局限性是它的表达水平较低且可变，因此，由于NKG2C+ NK细胞群较少，NKG2C-NKCE 可能对某些患者无效。
7、其它潜在激活受体
其它可能的受体包括KIR2DS和KIR3DS，CD160、DNAM-1以及2B4等。
KIR2DS和KIR3DS是抑制性NK细胞Ig样受体（KIR）家族成员，不过他们是两种激活受体。与其他KIR共享两~三个Ig样胞外结构域，但胞内没有ITIM。研究表明，KIR2DS的表达与NK活化和细胞因子产生呈正相关。因此，KIR2DS和KIR3DS 是 NKCE 开发的潜在候选者。然而，和抑制KIR的胞外结构域的高同源性可能使获得区分这两种类型KIR的特异性CDR序列变得具有挑战性。
CD160是一种Ig样跨膜蛋白，类似KIR受体，在一部分具有高细胞毒性的NK细胞和一部分T细胞中表达。与其配体HLA-C结合后，CD160可活化NK细胞，导致高效的肿瘤细胞杀伤和细胞因子释放， 使其成为NKCE 开发的潜在靶标。然而，CD160已被证明在激活NK细胞后发生下调。
DNAM-1，也称为CD226，是另一种在NK细胞、T细胞和某些髓系细胞中组成型表达的激活受体。它是一种跨膜糖蛋白，具有两个Ig样结构域。DNAM-1 在 NK 细胞上的表面表达较低。因此，未来DNAM-1 参与的 NKCE 开发需要更具体的设计策略。
2B4 （SLAMF4，CD244）属于SLAM（信号转导淋巴细胞激活分子）家族，在NK和CD8+ T细胞中表达。它有两个Ig样胞外结构域和一个细胞质尾部，具有四个基于免疫受体酪氨酸的开关基序（ITSM），它可以与Nkp46、NKG2D和DNAM-1协同作用，从而显著增强NK细胞活化。
