仿生DNA水凝胶绷带——浙江大学俞梦飞团队基于中性粒细胞胞外陷阱启发的DNA水凝胶在伤口止血辅助剂中的新应用

文摘   科学   2024-07-16 18:12   广东  

01

引言

在医疗急救和外科手术中,严重创伤性出血是导致高死亡率的主要原因之一。迅速有效地控制出血,对于挽救患者生命至关重要。传统的止血方法,如压迫止血、缝合止血以及使用止血药物等,在处理浅表伤口时效果显著,但在面对深度、非压迫性创伤时,其效果往往有限。因此,开发一种能够迅速吸收水分、具备强大组织粘附力且模拟生物凝血机制的新型止血材料,成为了医学领域的研究热点。近期,浙江大学俞梦飞团队提出了一种基于中性粒细胞胞外陷阱(Neutrophil Extracellular Traps, NETs)启发的DNA水凝胶(DNAgel),该材料在快速止血和伤口愈合方面展现出了巨大的潜力。

02

过程

图1|DNAgel的制备和膨胀性能。a一个合成过程的示意图。b交联前后DNA溶液的照片。比例尺:1厘米。cDNAgel的SEM图像。比例尺:100 μm。DNAgel对应变振幅扫描的dG’和G”。e天然鲑鱼精子DNA和DNAgel的ATR-FTIR分析。f被DNAgel吸收的水滴图像。比例尺:1毫米。g膨胀过程中DNAgel的二维和三维形状的代表性照片。比例尺:2厘米。h掩模切割法,i宏观成型(比例尺2 cm),j微成型(比例尺2 mm)获得不同形状的DNAgel。具有代表性的图像来自三个(b、c、f-j)独立的实验,结果相似。源数据作为源数据文件提供。

研究团队以天然提取的鲑鱼精DNA为原材料,利用化学交联手段制备的水凝胶,亲水性良好,且具有相互连接的孔隙结构,表现出强液体吸收能力与体积膨胀能力,能够快速填充有限空间。


图2| DNA凝胶表现出良好的体外促凝能力和生物相容性。a红细胞(红色)和血小板(黄色)粘附于具有多孔腔的明胶海绵(GS)和表面致密的DNAgel的代表性SEM图像。比例尺:10 μm。b CLSM图像中红细胞(红色)和血小板(绿色)聚集并黏附在DNA网络(蓝色)表面。比例尺:200 μm(左);比例尺:100 μm(右,放大)。c用紫外可见分光光度计在540 nm处测量不同时间点的血凝样本的吸光度值,并在30 min时绘制代表图片。比例尺:1 cm。d DNAgel的凝血指数(BCI)及代表性图片,按BCI(%) = a实验阴性×100%。比例尺:1厘米。数据以均数±标准差表示(n = 3个生物学独立样本)。e DNAgel的溶血率,根据溶血率(%)= Ap At × 100%。f红细胞和血小板在DNA凝胶上的粘附和活化示意图。统计分析采用Tukey多重比较的单因素方差分析(c, d)。有代表性的图像来自三个(a-d)独立实验,结果相似。源数据作为源数据文件提供。

红细胞与血小板的集聚与粘附效能,作为衡量生物材料止血特性的关键参数之一,其重要性不言而喻。通过运用高精度的扫描电子显微镜技术,深入探究了血细胞与DNA水凝胶界面间的动态交互作用。观察结果显示,当血液样本与预先干燥的DNA凝胶相遇时,凝胶展现出卓越的吸液性能,迅速吸纳液体成分,而在此过程中,红细胞与血小板则被有效捕获并密集排列于DNA凝胶的紧实表层,形成独特的细胞富集现象。尤为引人注目的是,DNA凝胶表面不仅富集了血细胞,还清晰可见大量纤维蛋白的沉积,以及呈现出伪足结构的活化血小板,这些迹象均指向了凝血过程的积极启动与加速。进一步地,动态全血凝结实验以确凿的证据支持了DNA水凝胶在体外环境下的凝血效能,其能够迅速吸纳血液,并显著促进血凝块的形成,展现出高效的止血潜力。

此外,DNA水凝胶还展现出了优异的血液相容性,这意味着在促进凝血的同时,它能够与血液成分和谐共存,减少不必要的免疫反应或毒性作用,为医疗应用中的安全性与有效性提供了坚实保障。


图3 | DNA凝胶在体内浅表和深层出血模型中均显示出止血性能。a-c建立SD大鼠离断尾、肝穿刺、股动脉损伤模型,采用明胶海绵(GS)或DNAgel动态止血能力。比例尺:1厘米。数据以均数±标准差(n = 3)表示。面板a-c部分由Biorender.com创建。d股动脉和肝脏止血后腹腔灌洗液标本。比例尺:5毫米。误差棒,SDs (n=5)。(*p<0.05, *****p<0.01,p<0.001, ****p < 0.0001)。采用单因素方差分析和T多重比较(a-d)进行统计学分析。有代表性的图像显示了三个(a-d)独立的实验与相似的结果。源数据作为源数据文件提供。
通过大鼠尾部截断模型、肝脏破损模型、股动脉破裂模型的失血量比较,发现DNA水凝胶能够像绷带一样,快速封堵出血伤口并促进血凝块形成,表现出良好的体内止血能力。当与流血伤口接触后,DNA水凝胶绷带能快速吸收血液,粘附于伤口表面,防止血液溢出,同时浓缩血细胞和凝血因子。因此,铺垫于伤口下方的纱布上血污侵染面积较小,伤口失血量也小。

图4 | DNAgel促进创面愈合,完成皮肤再生。在每只大鼠背部沿脊柱对称形成6个直径1厘米的全层皮肤缺损,并按组进行治疗。a第0、3、5、7、10天愈合过程中的代表性伤口图像。比例尺:2毫米。b在不同的日子里会有伤口的痕迹。c各组伤口大小和d愈合率数据以平均±标准差(n = 3)表示。e各组在第7天(DNAgel组伤口闭合时间点)和第10天(DNAgel组总皮肤再生时间点)用CK14(红色)和DAPI(蓝色)进行免疫组化染色的代表性图像。比例尺:100 μm。f每组新再生皮肤组织的第7天和第10天的苏木精和伊红染色、Masson三色染色和天狼星红染色。紫色的虚线表示最初的创伤边缘。比例尺:1mm(上);比例尺:100μm(底部,放大)。采用采用Tukey多重比较的单因素方差分析(c,d)进行统计学分析。有代表性的图像来自两个(a,e,f)独立的实验,结果相似。源数据作为源数据文件提供。

鉴于DNA水凝胶在伤口密封与促进止血方面展现出的卓越性能,研究团队进一步将其应用于全层皮肤缺损模型的愈合实验中,旨在深入探索其作为先进伤口敷料的潜力。实验结果显示,经DNA水凝胶处理的全层切除伤口,其愈合进程显著加速。具体而言,在治疗的第7天,伤口边缘区域仅见少量中性粒细胞浸润,这标志着炎症反应的适度且有效控制;同时,镜下观察可见新生血管网络的形成、表皮组织的再生以及毛囊的初步重建,且基底膜处已有丰富的胶原纤维沉积,这些都是伤口愈合进入增殖阶段的重要标志。至第10天,经DNA水凝胶精心护理的缺损皮肤区域实现了近乎完全的愈合,其外观与质地均接近未受损的正常皮肤,这一惊人成果充分证明了DNA水凝胶在促进真皮组织再生方面的非凡能力。综上所述,DNA水凝胶不仅是一款高效的止血材料,更展现出作为未来伤口护理领域理想敷料的巨大潜力,为加速伤口愈合、减少疤痕形成提供了创新解决方案。

03

总结

综上所述,该工作报道设计了基于DNA材料的仿生凝胶网络,该网络不仅展现出卓越的液体吸纳与体积膨胀特性,还能像智能绷带一般,作为物理屏障有效减缓血液流动,从而在急救止血中扮演关键角色。为了全面评估其性能,研究团队选用了商用明胶海绵作为参照,系统性地探索了DNA水凝胶在生物相容性、体内外凝血效率以及促进伤口愈合等多方面的表现。实验结果显示,DNA水凝胶具备出色的血细胞粘附与聚集能力,并能有效激活血小板,这些特性共同作用于凝血机制,使其在多种出血模型中,特别是大鼠的深部不可压缩性肝脏出血模型中,展现出了令人瞩目的止血效果。此外,在全层皮肤切除的动物模型中,DNA水凝胶同样表现出色,显著加速了伤口的愈合进程与皮肤组织的再生,为伤口护理领域带来了新的希望。

本研究不仅为DNA水凝胶作为止血生物材料的潜力提供了强有力的证据,还开创了一种简单而前景广阔的应用策略,有望在未来医疗实践中发挥重要作用,为急救止血与伤口管理带来革命性的改变。



原文链接:

https://doi.org/10.1038/s41467-024-49933-3



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