没有同型对照抗体,没有FITC和PE,这流式实验咋做?

文摘   2024-08-22 18:00   上海  

一个标准的流式实验,包括以下试剂:
(以T淋巴细胞亚群检测为例,方案来自吴丽娟主编《流式细胞术临床应用》人民卫生出版社,2020)

同型对照

(参考陈朱波,曹学涛《流式细胞术:原理、操作及应用》,科学出版社,2014,第二版)

抗体包含有特异性结合抗原位点的Fab段和相对保守的Fc段。
抗体的特异性表现在Fab段,标记时利用Fab段的抗原结合位点与细胞上的抗原分子特异性结合。
有些细胞表面表达FcR(Fc受体),FcR可以与荧光素偶联抗体的Fc段结合,这种结合是非特异性的。因此,在实际应用时,必须用同型对照抗体和样品封闭去除Fc段的影响

(人的Fc受体在细胞膜上的示意图,Immunological Reviews,2015)

荧光素偶联抗体

荧光素吸收一定波长的光能,外层电子从基态跃迁到激发态,受激电子很快返回基态,释放出一定波长的发射光,称之为荧光。
不同荧光素有不同的发射光谱,流式细胞术利用这一原理进行多参数分析。
双激光四色流式一般使用:FITC/PE/PerCP(或PerCP-Cy5.5)/APC
双激光六色流式一般使用:FITC/PE/PerCP(或PerCP-Cy5.5)/PE-Cy7/APC/APC-Cy7

可以想见,流式实验必须有同型对照抗体

也少不了FITC、PE等常规荧光染料

凉凉的分界线后,我们来看看文章题目的问题:

没有同型对照抗体,没有FITC和PE,这流式实验咋做?

如果将抗体的可变区与荧光蛋白基因融合,采用细胞重组表达,一步法生物合成。
这样就可以得到所谓单分子荧光抗体。
  • 取代了Fc段,可以无需同型对照抗体
  • 荧光蛋白荧光信号强,均一度好,批间差小,稳定性高。
因诺赛开发的单分子荧光抗体可以达到以上效果。
因诺赛单分子抗体与其它公司产品的比较;

多色流式实验

如果连接上磁珠,还可以实现磁珠细胞分选。

我们来看几个实例:
CD4+T细胞

CD8+T细胞

CD19+B细胞

分选后纯度均达99%以上。

新产品需要接受广大客户的检验,因诺赛生物开发的单分子荧光抗体目前接受用。
部分分析产品见下表:

部分分选抗体见下表:

其它产品见下表;

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关于因诺赛生物


因诺赛生物专注于诊断标志物和治疗靶点的挖掘,为体外诊断公司、制药企业及科研客户提供更好的重组蛋白和抗体原料,能根据客户的需求进行产品定制,促进产业链发展,提升行业生态。


公司专注抗体研究十余年。公司技术团队由多位海内外博士组建,具备专业细分领域的深度和解决市场需求的广度,与厦门大学、中山大学、中科院、南方医科大等知名高校、科研院所建立了深入的合作,将国际前沿的科研成果进行应用转化,不断升级公司技术平台,为基础研究、疾病诊断和治疗提供更好的解决方案,促进人类健康发展。


因诺赛生物聚焦抗体和重组蛋白产品及技术服务,为客户提供整体解决方案。 在流式检测抗体的基础上,公司继续开发了磁珠分选抗体,对免疫细胞实现高效特异分选。公司已申请发明专利15项,授权7项,获得“创业之星”荣誉称号和“合成生物学企业”认定。



陈在不在
作者自媒体 @ 生命科学与大健康产业 —— 聚焦原创,相信正向,眼中有光,一路向阳
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