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微球表面特性:羧基化微球的表面特性直接影响偶联效率。
羧基密度:羧基密度越高,蛋白质附着的位点就越多,偶联效率越高。但过度的拥挤会导致空间位阻。
表面电荷:微球的离子电荷会影响蛋白质的吸附。正负电荷之间的平衡可以增强静电引力,提高偶联效率。
非特异性吸附:普通的羧基磁性荧光编码微球(本质是聚苯乙烯磁球)对蛋白质存在一定的非特异性吸附,在某些项目中导致背景值/噪音值显著增高,从而影响最终的检测结果。
蛋白质的性质:被偶联的蛋白质的特性在确定偶联效率方面也起着重要作用。
分子量:较大的蛋白质可能会在空间上阻碍其他蛋白质或分子的附着,从而降低整体偶联效率。相反,较小的蛋白质由于空间阻碍较小,可能更容易偶联。
等电点(pI):蛋白质的pI会影响其在给定缓冲液中的电荷。当溶液的pH值低于蛋白质的pI时,通常会发生有效偶联,导致净正电荷,增强对带负电荷微球的静电吸引。当遇到某些蛋白等电点特别低时,偶联效率往往是不理想的。
蛋白构象:蛋白质的构象状态(天然与变性)显著影响其与微球结合的能力。变性蛋白质可能会暴露出更多的反应位点,但也可能失去功能。
实验条件:偶联效率对偶联过程中使用的反应条件高度敏感。
pH:缓冲液的pH值会影响微球的电荷和蛋白质。最佳pH水平应促进两者之间的最大相互作用。通常,低于蛋白质pI的pH值会因正电荷增加而增强结合。
离子强度:缓冲液的离子强度可以屏蔽静电相互作用,影响蛋白质吸附。较低的离子强度可以通过促进静电吸引来增强偶联,而较高的离子强度会导致相互作用减弱。
温度:较高的温度可以增加分子运动并提高耦合效率。然而,过高的温度可能会使敏感的蛋白质变性,导致功能丧失。
反应时间:延长偶联时间可以提高效率,使更多的蛋白质与微球相互作用。然而,延长孵育时间也可能导致不希望的交联或聚集。
蛋白质浓度:较高浓度的蛋白质可以增加与微球表面相互作用的可能性,从而提高偶联效率。优化蛋白质浓度对于防止饱和和确保有效结合至关重要。
其中最重要的因素之一就是(PI),当遇到某些蛋白等电点特别低时,偶联效率往往是不理想的。如果遇到非常不好连的蛋白时,可以考虑用碧芯生物特有的吡啶二硫基微球或者表面SA修饰的微球来替代。
新型高分子修饰羧基微球
我们自主研发了一种新型的对抗体/抗原非特异性吸附低的高分子材料BS10K,将其包裹在聚苯乙烯微球的表面,并衍生出各种各样的活性官能团。
由于低吸附羧基磁性荧光编码微球被高分子材料BS10K包裹,从而阻断了疏水的聚苯乙烯表面与环境中的抗原/抗体接触,可有效的降低检测中的噪音信号。
同时,由于这层高分子材料的表层,可以衍生出更多的功能基团,有利于提高信号,增强检测的灵敏度。
以羧基微球为基础,通过表面聚乙二醇修饰,衍生出二硫键,然后偶联抗体。
具有以下优点:
低吸附,噪音值低 偶联工艺稳定 信号值更高
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L体系:使用658/712 nm的分群滤片; 传统流式平台体系:使用675/780 nm的滤片。
L体系的微球
传统流式平台体系的微球
兼容两大检测体系的微球
目前可提供15重
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