张贵超1 张宇轩2 李青青2 徐桂萍2
1石河子大学研究生院，石河子 832003；2新疆维吾尔自治区人民医院麻醉科，新疆麻醉管理临床医学研究中心，乌鲁木齐 830001
国际麻醉学与复苏杂志,2024,45(11):1151-1156 .
DOI：10.3760/cma.j.cn321761-20240422‑01149
基金项目
新疆维吾尔自治区卫生健康青年医学科技人才专项（WJWY‑202203）
ORIGINAL ARTICLES
【论著】
本研究拟通过盲肠结扎穿孔（CLP）法构建脓毒症大鼠模型，探究利多卡因对脓毒症大鼠早期肾损伤的影响。
1 材料与方法
选择160只SPF级雄性SD大鼠，采用随机数字表法分为4组（每组40只）：假手术组（S组）、盲肠结扎穿孔组（CLP组)、利多卡因组（L组）和生理盐水组（N组）。S组大鼠打开腹腔后立即缝合，其余组采用盲肠结扎穿孔（CLP）法建立脓毒症模型。L组大鼠建模完成即刻给予利多卡因负荷量10 mg/kg，再以10 mg·kg−1·h−1持续尾静脉泵注3 h；N组给予等体积生理盐水。
记录4组大鼠体重；于开腹即刻（T0）、CLP术后2 h（T1）、CLP术后4 h（T2）、CLP术后8 h（T3）、CLP术后20 h（T4）、CLP术后24 h（T5）时每组各取5只大鼠采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定血清白细胞介素‑6（IL‑6）、肿瘤坏死因‑α（TNF‑α）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、胱抑素C（Cys‑C）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）水平，苏木精‑伊红（H‑E）染色观察T5时肾组织病理学变化情况，收集并测定T1~T5时大鼠尿量；观察各组剩余10只大鼠72 h生存率。
2 结果
2.1 体重比较
4组大鼠体重比较差异无统计学意义（均P>0.05，表1）。
2.2 炎症因子IL‑6、TNF‑α水平比较
4组大鼠T0时IL‑6、TNF‑α水平差异无统计学意义（均P>0.05）。与S组比较，CLP组、L组和N组大鼠T1~T5时IL‑6、TNF‑α水平较高（均P<0.05）；与CLP组比较，L组大鼠T1~T5时IL‑6、TNF‑α水平较低（均P<0.05），N组差异无统计学意义（均P>0.05）；与N组比较，L组大鼠T1~T5时IL‑6、TNF‑α水平较低（均P<0.05）。见图1。
2.3 肾功能指标比较
4组大鼠T0时Cr、BUN、Cys‑C、NGAL水平差异无统计学意义（均P>0.05）。与S组比较，CLP组、L组和N组大鼠T1~T5时Cr、BUN、Cys‑C、NGAL水平较高（均P<0.05）。与CLP组比较：L组大鼠T1~T5时Cr、BUN、Cys‑C、NGAL水平较低（均P<0.05）；N组大鼠T1、T2时Cr水平较低，T3~T5时Cr水平差异无统计学意义（均P>0.05）；N组大鼠T1~T5时BUN、Cys‑C、NGAL水平差异无统计学意义（均P>0.05）。与N组比较，L组大鼠T1~T5时Cr、BUN、Cys‑C、NGAL水平较低（均P<0.05）。见图2。
2.4 尿量比较
与S组比较，CLP组、L组和N组大鼠T1~T5时尿量较少（均P<0.05）；与CLP组比较，L组大鼠T1~T5时和N组大鼠T1时尿量较多（均P<0.05），N组大鼠T2~T5时差异无统计学意义（均P>0.05）；与N组比较，L组大鼠T2~T5时尿量较多（均P<0.05），T1时差异无统计学意义（P>0.05）。见图3。
2.5 肾组织H‑E染色
4组大鼠T5时肾组织中肾小球、肾小管及小管间质结构完整，肾皮质、髓质结构清晰，肾单位形态结构正常，基底膜、系膜区均未见炎症细胞浸润（图4）。
2.6 生存率比较
S组大鼠72 h生存率100%（10/10），CLP组大鼠72 h生存率10%（1/10），L组大鼠72 h生存率60%（6/10），N组大鼠72 h生存率40%（4/10）。与S组比较，CLP组、L组和N组大鼠72 h生存率较低（均P<0.05），L组和N组大鼠72 h生存率差异无统计学意义（均P>0.05）；与CLP组比较，L组大鼠72 h生存率较高（P<0.05），N组大鼠72 h生存率差异无统计学意义（P>0.05）；与L组比较，N组大鼠72 生存率差异无统计学意义（P>0.05）。见图5。
3 讨论
持续监测血清Cr、BUN水平以及尿量是诊断急性肾损伤（AKI）的必要手段，但机体发生脓毒症时组织器官有效灌注减少，影响了Cr、BUN的精准度，同时在积极抗休克时液体复苏可能将其稀释，本研究结果中N组T1和T2时点的Cr水平与CLP组比较差异有统计学意义，考虑是由于被输注的生理盐水稀释。利尿剂的使用也影响尿量的参考价值，诸多不确定因素导致很难明确脓毒症相关性AKI确切的发生时间，严重影响了治疗效果和预后。CLP法是制备脓毒症模型较为成熟可靠的方法，能够模拟临床脓毒症患者状态，CLP术后24 h也正是AKI早期。本研究在光镜下并未观察到细胞结构的实质性改变，与Bellomo等研究结果一致，早期脓毒症相关性AKI的改变主要表现为功能性而非结构性，并且此过程是可逆转的，功能和结构非同步变化即组织学与功能分离。
本研究增加了对Cys‑C、NGAL水平的监测。与S组比较，其余3组大鼠IL‑6、TNF‑α水平升高，并且Cr、BUN、Cys‑C和NGAL水平也伴随升高，尿量减少，推测肾功能受损与机体过度的炎症反应密切相关。前期系列研究印证了利多卡因通过抑制TLR4/NF‑κB通路来减轻脓毒症大鼠炎症反应，本研究中，与CLP组比较，L组大鼠IL‑6、TNF‑α水平降低，同时Cr、BUN、Cys‑C和NGAL水平也降低，生存率和尿量也明显提高，因此推测利多卡因对肾滤过功能的影响可能是通过发挥抗炎作用实现的，机体适应性保护机制为了保证结构完整，故功能先于结构发生改变。
本研究中，与N组比较，L组大鼠IL‑6、TNF‑α、Cr、BUN、Cys‑C和NGAL水平均降低，更加证实静脉泵注利多卡因会影响脓毒症大鼠肾功能，且与利多卡因抑制炎症反应有关。
本研究不足之处在于只初步测定肾滤过功能指标来反映肾损伤，观察了利多卡因减轻脓毒症肾损失的可能机制，未来还需要进一步使用信号通路抑制剂或基因敲除大鼠深入开展研究，进一步明确其机制。
综上所述，静脉泵注利多卡因可以抑制IL‑6和TNF‑α表达，减轻炎症反应，减少脓毒症大鼠早期肾损伤，起到肾保护的作用。
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