一、minigene技术概述：
mRNA前体的正确剪接是真核生物基因表达的关键步骤，剪接异常将会影响基因的表达量及其功能。minigene技术又称为mRNA异常剪接的体外验证实验，是针对突变位点是否影响mRNA剪接的细胞水平验证。
通过克隆带有变异位点（适用于在剪切位点附近的内含子、外显子以及深度内含子中的点突变、插入及缺失等变异类型）的目标基因组片段，构建重组表达载体，转染细胞株，RNA抽提及cDNA反转，再利用电泳和测序技术验证该突变是否影响mRNA剪接(包括外显子缺失、内含子滞留等) 。
几个数据：
· 15%~60%的突变都是通过影响mRNA剪接致病。病人RNA检测和minigene实验结果的完全一致性达到88%.
· minigene实验结果对于突变的致病性及是否影响剪接的提示作用几乎达到100%(Hellen M. 2015 Mol Genet Genomic Med)
二、项目优势及服务特点：
由于此项实验确实存在阴性结果的可能性，即突变虽然预测影响mRNA剪接或位于经典剪切区域内，但确实没有影响该位点的剪切。
因此我们：
（1）首先会根据突变的特点，结合多种生信预测的算法，帮助客户预测阳性结果（即突变会影响剪切）的可能性，并设计优化实验方案；
（2）会根据客户需求、疾病特点等因素，选取两种（或以上）不同的真核表达载体以及两种（或以上）不同组织来源的细胞系进行mRNA剪切验证，从而最大程度地保证实验结果的可靠性；
（3）全套自主研发的pcMINI-C/N系列载体，针对首/末内含子、超长内含子、超长外显子等各种复杂情况。
三、minigene技术服务流程：
（1）针对基因结构和突变位置，进行生信分析，优化并制定实验方案
（2）调取目的基因，构建minigene重组表达载体
（3）细胞转染
（4）RNA抽提及转录分析
四、样品寄送要求：
客户需提供：
（1）基因信息，突变信息或检测报告；
（2）含有突变位点的 gDNA样品（纯合、杂合均可，患者、携带者均可）；
（3）正常 gDNA；低温寄送。
五、服务报告：
内容包括：
生物信息学预测报告，minigene构建策略示意图，重组载体鉴定结果，minigene剪接电泳图及测序结果，分析总结报告。
六、实验周期及收费：
实验周期从收到DNA样本开始计算，一般5-8周左右完成。收费金额根据待检测minigene外显子和内含子的序列长度以及突变所在位置、载体数量和细胞种类数量等因素均有差异，具体价格请详询。
七、联系方式：
武汉百翼生物科技有限公司
湖北省武汉市高新大道666号光谷生物城B7栋5楼
联系人：小秦 15527135357 微信同号
