一、实验概述
Caco-2细胞转运模型是首个模拟肠道吸收的药物筛选模型，已广泛应用于药物在小肠吸收的评价和转运机制研究中。它可在细胞水平上提供药物分子透过小肠黏膜的吸收、分布、代谢、转运等信息。
二、实验步骤
Caco-2细胞的培养
1. 采用MEM完全培养液（含10%胎牛血清、1% NEAA、1%双抗）在37℃和5%CO2条件下培养Caco-2细胞；
2. 每隔一天换一次培养液。当细胞汇合程度达80%时，进行细胞传代。不允许细胞过度汇合（＞90%），否则会影响随后Caco-2单层细胞的形成。将细胞培养液吸出，用PBS清洗2次，加入0.25%胰蛋白酶-0.02% EDTA进行消化。
3.取细胞适量接种到培养瓶继续培养或进行铺板操作。
转运实验
1. 接种细胞：用培养基将Caco-2细胞浓度调整至1.0-1.5×105/ml，在Transwell板的基底侧（Basolateral side，B）加入1.5 ml MEM完全培养液，在顶侧（Apical side，A）加入细胞悬液0.5 mL；
2. 培养细胞：培养箱中孵育，每两天换一次培养液，培养一周后每日换液，培养至21天
3. 电阻测定：采用Millicell ERS电阻仪测定跨上皮细胞电阻（>300Ω•cm2），检测细胞单层的致密性和完整性。
4. 药物转运实验：选择符合转运条件的细胞孔（>300 Ω•cm2），用预热（37℃）的HBSS缓冲液洗2~3 遍，并置37℃孵育平衡20~30 min，吸弃洗液。
1）A→B：分别取0.5 mL含有药物的HBSS溶液加入A室作为供给液，同时B室加入1.5 mL空白HBSS缓冲液作为接收液；37℃条件下转运2 h；于不同时间点，分别从B室取样，酶标仪或者HPLC检测药物含量。
2）B→A：取1.5 mL的含药溶液加入B室，加入0.5 mL空白HBSS缓冲液于A室；37℃条件下转运2 h；于不同时间点，分别从A室取样，酶标仪或者HPLC检测药物含量。
数据处理
表观渗透系数Papp的计算公式如下：
dC /dt 为单位时间药物转运量，V为溶液体积，A 为有效渗透面积，C0为初始药物浓度。
三、注意事项
本实验的难点在于Caco-2单层细胞模型的建立，建议开展转运实验前，以21天后细胞的电阻值为依据，考察不同细胞接种密度，摸索单层细胞形成的条件。
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