尖锐湿疣患者组织中P16INK4A、ZnT1的表达及其与HPV感染和预后的关系

关键词：尖锐湿疣; P16INK4A; 锌离子转运体1; 人乳头瘤病毒; 相关性; 预后

全文主要内容如下

探讨尖锐湿疣(CA)患者组织中P16INK4A蛋白、锌离子转运体1(ZnT1) mRNA表达水平及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。

选取2019年5月至2022年5月在该院就诊的82例CA患者作为CA组,另选取同期在该院进行包皮环切术或外阴整形术的64名皮肤健康者作为对照组。收集CA组疣体组织及对照组的正常包皮或外阴组织,采用聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交技术进行HPV分型检测,比较CA组与对照组,以及不同HPV分型CA患者P16INK4A与ZnT1 mRNA表达水平。所有CA患者均随访治疗8个月,复发的患者纳入复发组,未复发的患者纳入未复发组,比较两组P16INK4A与ZnT1 mRNA表达水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析P16INK4A、ZnT1单独及2项指标联合检测对CA预后复发的预测价值。

82例CA患者中,27例为低危型感染(32.93%),25例为高危型感染(30.49%),30例为混合型感染(36.59%),感染HPV亚型包括6、11、16、18、31和51。CA组P16INK4A、ZnT1表达水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。P16INK4A高表达组45例、低表达组37例;ZnT1高表达组43例、低表达组39例。P16INK4A mRNA低表达组与高表达组年龄、性别、疣体数量、疣体位置比较,差异均无统计学意义(P>0.05),疣体直径、病程、HPV分型比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。ZnT1 mRNA低表达组与高表达组年龄、性别、疣体数量、疣体位置比较,差异均无统计学意义(P>0.05),疣体直径、病程、HPV分型比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。混合型、高危型P16INK4A、ZnT1 mRNA表达水平明显高于低危型,差异均有统计学意义(P<0.05);高危型P16INK4A、ZnT1 mRNA表达水平明显高于混合型,差异均有统计学意义(P<0.05)。CA患者随访8个月后,有29例复发(复发组),53例未复发(未复发组)。复发组P16INK4A、ZnT1 mRNA表达水平明显高于未复发组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,P16INK4A、ZnT1 mRNA单独及2项指标联合检测预测CA预后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.840、0.880、0.963,P16INK4A与ZnT1 mRNA联合检测预测CA预后复发的AUC大于2项指标单独检测(Z二者联合-P16INK4A=2.097,P=0.036;Z二者联合-ZnT1=2.074,P=0.038)。

（主要结果图表）

表1 RT-qPCR引物序列

表2 两组P16INK4A、ZnT1 mRNA表达水平比较

表3 不同P16INK4A mRNA表达水平CA患者的临床病理特征比较[n(%)]

表4 不同ZnT1 mRNA表达水平CA患者的临床病理特征比较[n(%)]

表5 不同HPV分型CA患者P16INK4A与ZnT1 mRNA表达水平比较

注:与低危型比较,aP<0.05;与混合型比较,bP<0.05。

表6 未复发组与复发组P16INK4A、ZnT1 mRNA表达水平比较

表7 P16INK4A、ZnT1 mRNA单独及2项指标联合检测对CA患者预后复发的预测价值

注:-表示无数据。

P16INK4A是P16基因的产物,位于人类染色体9p21位点,是由4个外显子及3个内含子构成的一种细胞周期调节蛋白。在细胞周期中,P16INK4A作用于pRb上游,通过直接抑制周期蛋白依赖性激酶4/6(CDK4/6)或与间接细胞周期素D1蛋白竞争性结合CDK4/6,使pRb基因失活及细胞周期蛋白磷酸化水平降低,进而其转录活化因子E2F蛋白不能游离活化,无法进入细胞核及合成DNA合成期(S期)所需基因产物,因此细胞增殖受到抑制,细胞周期停滞于DNA合成前期(G1期)。P16INK4A可通过抑制细胞增殖来调节细胞周期,进而影响机体的生理和病理过程。有研究表明,在乳腺癌、肺癌、结肠癌等多种恶性肿瘤中,P16INK4A基因表达下调或不表达,进而生长抑制作用消失,促进了癌细胞的增殖。相关研究表明,在宫颈癌患者中,P16INK4A在癌组织中高表达,其作用机制是宫颈癌细胞在转化阶段,宫颈上皮细胞会产生大量E7癌蛋白使pRb基因失活,细胞周期紊乱,癌前细胞病变并大量增殖,使P16INK4A高表达。DUAN等研究表明,HPV持续感染是宫颈癌发生与发展的重要原因,而高表达P16INK4A是HPV感染细胞癌变的必需条件,当细胞未被HPV感染或感染处于HPV病毒增殖阶段时,P16INK4A表达水平不会升高,而HPV感染细胞发生病变,显现出致癌性时P16INK4A才会出现高表达。因此,检测P16INK4A表达水平对区分HPV感染阶段具有重要意义。

ZnT是机体为维持细胞内外Zn2+平衡而进化形成的一类特殊蛋白,对机体的生长发育具有重要作用。ZnT1是最早被发现的ZnT,其广泛表达于血清和各个组织中,主要通过胞内转运和外排Zn2+来调节体内蛋白质合成、细胞增殖分化及多种代谢过程,而ZnT1表达异常时会导致锌中毒、DNA合成受损、免疫失调等相关疾病的发生。周龙等研究发现,胶质瘤患者ZnT1 mRNA表达水平升高,为瘤细胞增殖提供了大量的营养物质,并通过自身的转运优势为瘤细胞侵袭创造了有利条件。刘文娇等研究表明,在雄性大鼠前列腺、附睾等性腺组织中,ZnT1 mRNA和蛋白均有表达,且锌代谢紊乱会导致大鼠的生育能力受损,表明ZnT1在调节机体生殖系统中发挥着重要作用。

本研究结果显示,CA组P16INK4A、ZnT1表达水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。P16INK4A mRNA低表达组与高表达组年龄、性别、疣体数量、疣体位置比较,差异均无统计学意义(P>0.05),疣体直径、病程、HPV分型比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。ZnT1 mRNA低表达组与高表达组年龄、性别、疣体数量、疣体位置比较,差异均无统计学意义(P>0.05),疣体直径、病程、HPV分型比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。有研究表明,高危型HPV患者组织中P16INK4A和ZnT1表达水平明显高于低危型和混合型,而高危型HPV感染与宫颈癌的发生密切相关,与本研究结果一致,因此推测CA患者疣体组织P16INK4A高表达可能意味着患者体内HPV感染细胞有癌变的风险,应尽早干预治疗。ROC曲线分析结果显示,P16INK4A、ZnT1 mRNA单独及2项指标联合检测预测CA预后复发的AUC分别为0.840、0.880、0.963,P16INK4A与ZnT1 mRNA联合检测预测CA预后复发的AUC大于2项指标单独检测(Z二者联合-P16INK4A=2.097,P=0.036;Z二者联合-ZnT1=2.074,P=0.038)。表明联合检测P16INK4A、ZnT1 mRNA表达水平对CA预后复发的预测价值较高,对改善CA患者预后具有重要意义。

综上所述,P16INK4A、ZnT1在CA患者疣体组织表达水平明显升高,且二者mRNA表达水平与HPV分型密切相关,P16INK4A高表达的CA患者体内HPV感染细胞可能有癌变的风险,后续将对其参与CA发展的具体机制进行深入研究。

以上内容有删减，原文《尖锐湿疣患者组织中P16INK4A、ZnT1的表达及其与HPV感染和预后的关系》刊登于2024年21卷13期

作者：王泽淑,王万军,匡乃峰△

作者单位：1.黑龙江中医药大学研究生院;2.黑龙江中医药大学附属第一医院针灸一科

编辑：刘煦

审阅：王明丰

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