导言
我们非常高兴地宣布，从今以后每周末我们会展示“中文实验方法手册”中的文章，本次展示的是《实验动物胚胎操作实验手册》里的内容。这本手册汇编了Bio-protocol期刊中全球科学家的实验方案，涵盖了实验动物胚胎操作的各个方面。
摘要
关键词：胚胎移植 受体 腹腔镜
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
一、受体挑选
1.选择健康、无生殖道疾病的雌性猴；
2.年龄在4-10岁，体重3-5.5 kg较好，3 kg以下太瘦，体质相对较差，5.5 kg以上过于肥胖的动物，容易造成体内激素水平下降，内分泌失调，影响胚胎着床。
3.优先选择有生产（生育）史的雌性猴做受体，这样的猴有产仔及带仔经验，能提高仔猴出生存活率。
4.根据胚胎时期选择相对应的移植窗口期，在月经周期第13-18天、子宫内膜厚度达到2.5 mm以上时移植最佳。早期胚胎即2-4细胞时期胚胎，可选择移植给卵泡期（临近排卵的卵泡）和排卵1-2天的受体；16细胞至囊胚期的胚胎，移植给排卵1-4天的受体，一般不选择处于卵泡期的受体。
5.对用于超排取卵的供体实验猴，我们选择其做受体时，需要距离上次取卵时间间隔至少3个月才能使用。自体移植除外，可以在取卵后第2天进行胚胎移植。
二、受体动物准备
1.受体动物手术前禁食12 h。
2.麻醉：舒泰50，剂量4-6 mg/kg，肌肉注射。
3.麻醉前给药：阿托品0.1 mg/kg，皮下注射；青霉素10万单位/kg，肌肉注射。
4.被毛：上至肚脐上方3 cm处，下至腹股沟处，将整个肚皮的毛剔除干净。
5.保定：麻醉后的受体动物以头低臀高的姿势放置在手术台上，然后将四肢分别用绷带固定在手术台的四个支架上。
6.消毒：先用1.8-2.2%碘酊对术部进行消毒（腹部剃毛区全部消毒），待碘酊干燥后，用75%的酒精脱碘三次。
7.铺上一次性无菌洞巾，暴露术区。
三、手术方法
1.气腹针以45度角于脐轮上缘1 cm处插入腹腔，接气腹机，进气速度不超过1 L/min,腹腔内压力不超过24 mmHg。
2.待腹部鼓起皮肤无褶皱后，拔掉气腹针，用眼科剪沿气腹针针眼向肚脐方向剪 0.5cm 的切口，提起脐上皮肤，将戳卡先斜后垂直慢慢插入腹腔，拔出套管芯， 接通光源及显示屏，缓慢插入腹腔镜。
3.气腹针在右侧腹股沟上约2 cm处插入，用气腹针拨开附着在卵巢上的大网膜或者脂肪，使左右两侧卵巢暴露。
4.用眼科剪在卵巢对应部位的皮肤开口约1 cm，再用止血钳伸入开口处，夹住包裹卵巢的脂肪并牵引出腹腔外固定好。
5.拔出腹腔镜，关闭腹腔镜系统，打开无影灯照在暴露的卵巢上。
6.理顺输卵管，用镊子轻轻夹住喇叭口，胚胎操作人员将吸有胚胎的移植管顺喇叭口插入输卵管，吹入胚胎。
7.待胚胎放置后，将输卵管，卵巢小心放回腹腔复位。
8.采用结节缝合方法缝合术口，第一步用可吸收肠线将内膜缝合；第二步用不可吸收丝线将皮肤缝合。术口消毒后将受体送回饲养笼内。
图1和图2. 腹腔镜介导下，将输卵管牵引出腹腔。
图3. 固定输卵管及喇叭口。
图4. 胚胎装入移植管。
图5. 胚胎移植入输卵管
术后护理
手术后，将由专业的兽医人员进行日常护理，首先给动物保温，直至动物完全清醒，活动正常。术后三天内，每天观察动物精神状况及伤口情况，并每天注射一次镇痛药克洛芬（1 mg/kg）以及青霉素（10万 IU/kg），第四天停药。
四、食蟹猴早期妊娠诊断
图6. 胚胎移植后第26天怀孕子宫及胎儿超声图像
注意事项
引用格式
