导言
小bio选择了10篇过去一年Bio-protocol期刊发表的有代表性的“蛋白表达”相关实验方案。这些方案由全球顶尖科学家分享，方案内容详实、易于操作、容易复现，希望能为您的研究提供帮助与启发。
● In-house Extraction and Purification of Pfu-Sso7d, a High-processivity DNA Polymerase（点击标题可跳转至对应推文）
内部提取和纯化Pfu-Sso7d：一种高持续性的DNA聚合酶
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.4967
作者：Aisha Mahboob、Nishat Fatma、Afzal Husain
文章简介：本文介绍了一种基于乙醇和丙酮沉淀的简便高效Pfu-Sso7d DNA聚合酶纯化方法，并优化了配套的PCR缓冲液。该方法显著降低了实验成本，所纯化的Pfu-Sso7d及其缓冲液在PCR实验中表现优异。
优化农杆菌介导的生物能源作物亚麻籽荠瞬时性基因表达
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.4964
作者：Pawan Kumar、Zeeshan Z. Banday、John L. Riley、Jean T. Greenberg
文章简介：本文建立了一种针对能源作物亚麻籽芥(Camelina sativa)的农杆菌介导瞬时基因表达优化方法，可用于蛋白质亚细胞定位研究。该方法适用性广、效率高，16-18天内即可完成，适合研究亚麻籽芥系统中的重要基因功能。
● Transient Expression Assay and Microscopic Observation in Kumquat Fruit（点击标题可跳转至对应推文）
金桔果实瞬时表达测定与显微观察
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.4968
作者：Jinli Gong、Xuepeng Sun
文章简介：本文介绍了一种农杆菌介导的金桔果实瞬时转化方法，通过GFP-Lifeact标记的肌动蛋白丝实现基因功能快速分析和活细胞成像。该方法具有高转化效率和较长的表达窗口，为果实生物学中细胞过程的研究提供了一种高效手段。
天然SARS-CoV-2刺突蛋白在哺乳动物细胞上的展示及其抗体亲和力和ADCC测定
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5119
作者：Rebecca E. Wilen、Annalee W. Nguyen、Ahlam N. Qerqez、Jennifer A. Maynard
文章简介：本文介绍了一种在哺乳动物细胞膜上展示原生SARS-CoV-2刺突蛋白的方法，用于测定抗体亲和力和抗体依赖的细胞毒性（ADCC）。该方法无需刺突蛋白稳定突变，可快速分析多种刺突变体的抗体结合及Fc介导的ADCC活性，适用于评估抗体效力和变异影响。
● From Llama to Nanobody: A Streamlined Workflow for the Generation of Functionalised VHHs
从美洲驼到纳米体：生成功能化VHHs的简化工作流程
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.4962
作者：Lauren E.-A. Eyssen、Siva Ramadurai、Sahar Abdelkarim、Imogen Buckle、Katy Cornish、Hong Lin、A.K. Jones、Gary J. Stephens、Raymond J. Owens
文章简介：本文介绍了一种从羊驼免疫到筛选功能化单域抗体（VHH）的标准化工作流程，涵盖了文库构建、筛选和小规模表达等步骤。文章还提供了两套载体，分别适用于哺乳动物和细菌体系中的纳米抗体功能化应用，如成像和纯化。
● Methodology to Create Auxin-Inducible Degron Tagging System to Control Expression of a Target Protein in Mammalian Cell Lines
创建生长素诱导降解子标记系统以控制哺乳动物细胞系中靶蛋白表达的方法
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.4923
作者：Amit Rahi、Deepika K. Sodhi、Christine B. Magdongon、Rajina Shakya、Dileep Varma
文章简介：本文详细介绍了利用生长素诱导降解系统（AID）结合CRISPR/Cas9技术在哺乳动物细胞中实现靶蛋白标记和降解的方法。通过该系统，可以精确、快速地控制蛋白质的降解，揭示其在细胞过程中的功能，如研究CDT1在有丝分裂中的作用。
● Simplified Protocol to Demonstrate Gene Expression in Nicotiana benthamiana Using an Agrobacterium-Mediated Transient Assay
利用根癌农杆菌介导的瞬时测定法在烟草中展示基因表达的简化方案
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.4987
作者：Satyam Vergish、Ryan Wolf、Wen-Yuan Song
文章简介：本文提供了一种简化的农杆菌介导烟草瞬时表达实验方法，无需离心机和分光光度计，适合快速筛选细胞死亡相关基因。该方法适用于教学和K-12科普活动，并可用于研究如水稻XB3基因引起的细胞死亡表型。
● Engineering a CRISPRoff Platform to Modulate Expression of Myeloid Cell Leukemia (MCL-1) in Committed Oligodendrocyte Neural Precursor Cells
设计 CRISPRoff 平台以调节骨髓细胞白血病（MCL-1）在定向少突胶质细胞神经前体细胞中的表达
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.4913
作者：Melanie Gil、Catherine A. Hamann、Jonathan M. Brunger、Vivian Gama
文章简介：本文开发了一种基于CRISPRoff的诱导性基因沉默平台，用于在人类多能干细胞模型中调控MCL-1等关键基因的表达。该方法结合Sleeping Beauty转座子系统，实现了在少突胶质细胞分化过程中对必需基因的分阶段沉默。
● Chromogranin B Purification for Condensate Formation and Client Partitioning Assays In Vitro
嗜铬蛋白B的纯化用于体外凝聚体形成及客户蛋白分配实验
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5095
作者：Anup Parchure、Julia Von Blume
文章简介：本文提供了一种纯化带标记的全长嗜铬粒蛋白B的方法，保留其在高尔基网络（TGN）中的天然状态。该方法可用于体外凝聚体形成及客户分配的显微镜分析，研究嗜铬粒蛋白B的材料特性对其功能的影响。
● A Microplate-Based Expression Monitoring System for Arabidopsis NITRATE TRANSPORTER2.1 Using the Luciferase Reporter
基于微孔板的拟南芥硝酸盐转运蛋白2.1表达监测系统——利用荧光素酶报告基因
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5127
作者：Yoshiaki Ueda、Shuichi Yanagisawa
文章简介：本文建立了一种基于荧光素酶报告基因的微孔板系统，用于快速检测拟南芥NRT2.1基因的表达。该方法经济高效，适用于不同基因型和营养条件下NRT2.1表达的高通量动态分析。
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