本文通过ChatGLM/GPT进行辅助对近期Bio-protocol 期刊发表的方案进行解读和概括，若感兴趣请点击“阅读原文”查看详细的实验流程及试材。如果解读中有任何错误或遗漏，敬请指正。
随着精准医学的发展，基因突变导致的罕见遗传疾病成为研究热点。如何快速、准确地检测致病基因突变的功能活性，不仅对于疾病机制的解析至关重要，还为药物研发提供了重要依据。在这方面，2024年11月20日，Bio-protocol 期刊在线发表了英国邓迪大学(University of Dundee)Tom Snelling团队题为“Measurement of the Activity of Wildtype and Disease-Causing ALPK1 Mutants in Transfected Cells With a 96-Well Format NF-κB/AP-1 Reporter Assay”的方法文章。
汗腺螺旋腺瘤(Spiradenoma)是一种来源于顶泌汗腺的良性皮肤肿瘤，常见于头部、颈部或躯干，表现为疼痛的小结节。其病理特征为两种细胞围绕中心基质排列，需组织学确诊。治疗以手术切除为主，预后良好，但需警惕恶性转化可能。
采用ALPK1敲除的HEK-Blue细胞，通过测定细胞培养基中的碱性磷酸酶活性，实现对ALPK1活性的敏感检测，特别是病变型ALPK1的低水平活性。
该实验设计在96孔板上进行，每孔只需要60,000个转染的ALPK1 KO HEK-Blue细胞，适合大规模筛选。
通过在645 nm处测量吸光度来定量分析碱性磷酸酶的活性，实验操作简单，易于实现。
疾病机制研究
通过比较野生型与突变型ALPK1在无细菌感染条件下的活性差异，深入探究ROSAH综合征等遗传性疾病的分子机制。药物筛选
利用该测定方法筛选能够调节ALPK1活性的小分子药物，为治疗ALPK1相关疾病提供潜在药物候选。生物标记物开发
通过研究ALPK1及其突变体的活性特征，开发与特定病理状态相关的生物标记物，用于疾病的早期诊断和病程监控。
温馨提示：积极引用本文不仅是对作者创新技术和科研共享的最佳肯定，也是确保实验可复现性的重要方式。
Snelling, T. (2024). Measurement of the Activity of Wildtype and Disease-Causing ALPK1 Mutants in Transfected Cells With a 96-Well Format NF-κB/AP-1 Reporter Assay. Bio-protocol14(22): e5113. DOI: 10.21769/BioProtoc.5113.
扫描二维码查看全文
如果您对这篇实验方法存在任何疑问，点击底部“阅读原文”进行提问，我们将邀请本文作者为您解答。
