中国首都医科大学基础医学院陈振文团队 | 长爪沙鼠精子冷冻保存
学术
科学
2024-10-07 09:02
山东
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Bio-101 是 Bio-protocol 旗下的中文生命科学实验方案共享平台。通过与四百多个国内优秀课题组合作，以及上千名专家的共同努力，平台已出版九本高质量、同行评审、开放获取的中文实验方案电子手册，促进了中国科研人员之间的交流与合作。每周末，小bio将选出一些文章与大家分享，本次我们选择的是中国首都医科大学基础医学院陈振文团队的题为“长爪沙鼠精子冷冻保存”的方法文章。
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长爪沙鼠精子冷冻保存是动物保种和确保遗传多样性的重要基础性工作，也是实验动物生物净化的常用技术。我们综合考虑了年龄等多种因素，通过实验验证制定本技术规程。结果表明，方法有效可行，为后续其他工作奠定了良好基础。关键词：长爪沙鼠 精子 冷冻保存 复苏
1. 麦管（Planer, catalog number: FCBS010287） 3. 矿物油（Sigma, catalog number: M8410） 4. 精子冻存液（CPA, catalog number: KYD-001-EX） 5. HTF（CPA, catalog number: R18S3）4. 手术器械购置上海医疗器械（集团）有限公司, 手术剪(Y00030, 10cm直尖头），解剖剪(JD1050，10cm，直有钩)，眼科镊(JD1070，10cm直有钩)，显微镊（WA3210），显微剪（WA1030）②制作冻存管套，打好孔。标明麦管编号，长爪沙鼠品系，实验室PI，冻存日期和实验者。④做120 μL精子冻存剂(CPA)高滴。先用冻存保护剂做60 μL，覆盖少量矿物油后再加入60 μL，再用矿物油进行完全覆盖。⑤另做两个30 μL的CPA洗滴，用于在显微镜下清洗附睾(去除脂肪和血)①挑选适龄雄鼠，对雄鼠安死术。长爪沙鼠的雄鼠一般选择10 w以上，最佳12～18 w。②手术分离附睾，置常温的矿物油里清洗2遍；之后取出附睾，在吸水纸上去除上面肉眼可见的脂肪和血。③将附睾放入30 μL CPA溶液的洗滴中，将附睾上残存的脂肪和血液完全清理干净。将附睾放入被矿物油覆盖的120 μL CPA做成的液滴中，用显微剪剪3下，让精子自然游出。④常温下放在显微镜台面上3分钟，每分钟都要轻轻摇几下培养皿，使附睾中的精子可以尽量扩散到CPA中。用10μL移液器吸取精液，做成10μL的精液滴。⑤接下来准备冻存管，用三通阀分别吸取150 μL HTF，30 μL空气，10 μL精子，然后吸取空气直至上端HTF溶液吸到麦管的过滤棉塞处。⑥麦管两端用封口机进行封口。将封好口的麦管放入浮漂内，预冷10 min。感谢国家自然科学基金项目（Nos. 31572341, 31572347, 31772545, 31572348）和国家科技支撑计划项目（No. 2015BAI09B00）的资助。1. Low, B. E., Taft, R. A. and Wiles, M. V. (2016). Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery of Genetically Modified Mice. Methods Mol Biol 1438: 55-66.李长龙, 张静, 郭萌, 刘世景, 侯金莲, 朱艳敏, 吕珊, 杜小燕, 常在, 陈振文. (2021). 长爪沙鼠精子冷冻保存. // 实验动物胚胎操作实验手册. Bio-101: e1010927. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010927.
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