肺内panel:
空白对照:主要用于电压调节,帮助将细胞信号调整到图上合适的位置,并观察细胞的本底信号。它适用于细胞分群明显、背景荧光弱的情况,如CD3、CD4、CD8等的分群圈门。空白对照可以帮助排除细胞的自发荧光,但在非特异性染色较强时,仅用空白对照可能导致实验结果不准确。
同型对照(Isotype Control):用于排除背景荧光,更准确地排除假阳性。当非特异性染色较强时,同型对照可以提供更准确的圈门依据。同型对照与实验抗体同种属、同亚型,但不对靶标具有特异性结合,有助于识别和排除因抗体非特异性结合产生的背景染色。
FMO对照(Fluorescence Minus One Control):在多色染色分析中,FMO对照通过不染目标通道的颜色而染色其他所有指标,帮助识别和排除荧光漏溢的影响,以及更准确地设置阴阳性界限。FMO对照尤其适用于分群不明显或表达量不高的指标,可以作为某个指标的阴性对照,排除全染背景影响,有助于更准确地圈门。
FMO对照有两个作用:
(1)多色分析时,有些通道的信号不好区分,可能存在某个荧光对该通道干扰很大,可以使用FMO对照来找到这个荧光。
(2)作为我们需要重点分析的某个指标的阴性对照,可以排除全染的背景影响,有助于更准确地圈门。
对于一些分群不明显,或表达量不高的指标,使用FMO对照作为圈门依据会比空白对照更合适。
参考:
https://www.chem17.com/tech_news/detail/2899408.html#:~:text=3%E3%80%81FMO%E5%AF%B9%E7%85%A7%EF%BC%9AFMO%E5%AF%B9%E7%85%A7%E4%B9%9F%E5%8F%AB%E5%81%9A%E8%8D%A7%E5%85%89%E6%89%A3%E9%99%A4%E5%AF%B9%E7%85%A7%2F%E6%8A%97%E4%BD%93%E5%87%8F%E4%B8%80%E5%AF%B9%E7%85%A7%EF%BC%88Fluorescence-Minus-One,Control%EF%BC%89%EF%BC%8C%E6%98%AF%E6%8C%87%E5%9C%A8%E5%A4%9A%E8%89%B2%E6%9F%93%E8%89%B2%E5%88%86%E6%9E%90%E6%97%B6%EF%BC%8C%E5%AF%B9%E5%85%B6%E4%B8%AD%E6%9F%90%E4%B8%80%E4%B8%AA%E9%80%9A%E9%81%93%E8%AE%BE%E7%BD%AE%E7%9A%84%E9%98%B4%E6%80%A7%E5%AF%B9%E7%85%A7%EF%BC%8C%E4%B9%9F%E5%B0%B1%E6%98%AF%E4%B8%8D%E6%9F%93%E7%9B%AE%E6%A0%87%E9%80%9A%E9%81%93%E7%9A%84%E9%A2%9C%E8%89%B2%EF%BC%8C%E5%85%B6%E4%BB%96%E6%8C%87%E6%A0%87%E9%83%BD%E6%9F%93%E8%89%B2%E3%80%82