链接在文末下面我们以凋亡检测为例，来学习一下：
https://www.abcam.cn/protocols/annexin-v-detection-protocol-for-apoptosis-zh
用于细胞凋亡检测的 Annexin V-FITC 染色方案
使用 annexin V-FITC染色，可同时添加碘化丙啶（PI）进行细胞凋亡早期检测的流程。
简介
在细胞凋亡的早期，磷脂酰丝氨酸 (PS) 残基（通常隐藏在质膜内）会暴露于细胞表面，可用于细胞凋亡的发现和检测。细胞凋亡过程中，PS 从质膜的细胞质面转移到细胞表面。Annexin V 是一种 Ca2+ 依赖性蛋白，对 PS 具有很强的亲和力，因此可用作检测细胞凋亡的探针。
下文是基于 Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒 (ab14085) 提供的方案设计的使用 Annexin V 进行 PS 暴露检测的方案示例。需要注意的是，当使用某一试剂盒时，请务必使用数据表提供的方案，因为这一方案是专为该产品设计的，用于该产品时效果最好。
目录
试剂
使用 Annexin V-FITC 孵育细胞
利用流式细胞术分析 Annexin V-FITC 的结合情况
利用荧光显微镜观察细胞染色
试剂
1X Annexin V 结合缓冲液
Annexin V-FITC
可选试剂：碘化丙啶
2% 福尔马林
可选试剂：胰蛋白酶（用于贴壁细胞）
方法
1.使用 Annexin V-FITC 孵育细胞
1.1 按照预期的方法诱导细胞凋亡。
1.2 离心收集 1-5 x 105 个细胞。
1.3 在 500 μL 1X Annexin V 结合缓冲液中重悬细胞。
1.4 加入 5 μL Annexin V-FITC 和 5 μL 碘化丙啶（PI，可选）。
1.5 室温下避光孵育 5 分钟。
替代步骤：对于贴壁细胞，用 annexin V-FITC 孵育前，先用胰蛋白酶轻轻消化细胞并用含血清的培养基洗涤细胞一次（步骤 1.3-1.5）。
1.6 根据分析方法，分别进行下述 B 或 C 操作
2. 利用流式细胞术分析 Annexin V-FITC 的结合情况
2.1 利用 FITC 信号检测器（通常为 FL1）在流式细胞术 (Ex = 488 nm; Em = 350 nm) 中分析 annexin V-FITC 的结合情况
2.2 如果添加碘化丙啶，则通过藻红蛋白发射信号检测器（通常为 FL2）分析 PI 染色。
3.利用荧光显微镜观察细胞染色
3.1 将步骤 1.5 得到的细胞悬液置于载玻片上。用盖玻片覆盖细胞。
替代步骤：如需分析贴壁细胞，可直接在盖玻片上培养细胞。
3.2 孵育（步骤 1.5）完成后，翻转载玻片上的盖玻片，并观察细胞。观察细胞前，还可以用 1X Annexin V 结合缓冲液洗涤细胞，并在 2% 福尔马林中固定细胞。
提示：固定前，必须用 Annexin V-FITC 孵育细胞，因为细胞膜破裂会导致 Annexin V 与细胞膜内表面上的 PS 发生非特异性结合。
3.3 使用 FITC 和罗丹明双色滤光片在荧光显微镜下观察细胞：
结合 annexin V-FITC 的细胞在质膜上呈绿色。
丧失膜完整性的细胞在整个细胞核中呈红色（PI），并在细胞表面（质膜）呈绿色光圈（FITC）。
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