Plant Journal|肌醇氧合酶MsMIOX2通过调节细胞壁果胶和半纤维素的生物合成,增强了苜蓿对盐碱胁迫的耐受性

文摘   2024-09-18 13:18   中国香港  

盐碱胁迫 / 苜蓿 / 细胞壁 / 肌醇氧合酶

土壤中盐碱的含量过高会引起植物的渗透胁迫和离子稳态失衡,导致活性氧(ROS)的高水平积累,并干扰细胞膜的通透性,从而阻碍植物生长。此外,盐碱胁迫还会破坏植物的叶绿体结构,降低光合作用的效率。
植物已经进化出一个复杂的稳态系统,可通过产生渗透保护剂(如可溶性糖、脯氨酸和多胺),来抵消盐碱胁迫引起的多种不利影响。然而,盐碱胁迫与植物细胞壁组成和结构之间的联系尚不清楚。
包围着细胞膜的细胞壁是植物生物量的主要组成部分,并保护植物细胞免受多种外部压力的侵害。细胞壁是一个复杂且动态的结构,由纤维素、半纤维素、果胶和蛋白质组成。果胶可以通过其结构和交联特性的变化影响细胞壁的水合作用和孔隙率,从而有助于提高植物的耐盐性。果胶中的羧基还可以与盐胁迫下的主要有毒离子Na+结合,防止其进入细胞质,从而维持正常的细胞代谢和生长。此外,半纤维素多糖在植物耐盐胁迫中也发挥了作用。然而,盐碱胁迫对植物细胞壁果胶和半纤维素含量的影响仍然不清楚。
肌醇(Myo-inositol, MI)是一种环状多元醇,在调节细胞代谢过程中起着至关重要的作用。MI及其衍生代谢物在所有真核生物中广泛分布,并在细胞壁多糖生物合成和氧化应激相关分子产生等植物生理过程中发挥重要作用。肌醇氧合酶(MI oxygenase, MIOX)是一种限速酶,不可逆地将MI转化为D-葡糖醛酸(D-GlcA),进而被葡糖苷酸激酶和UDP-糖基焦磷酸化酶转化为UDP-GlcA。
UDP-GlcA是参与半纤维素和果胶生物合成的多种核苷酸糖的主要前体,来自该途径的细胞壁多糖约占细胞壁生物量的一半。然而,MIOX相关的多糖合成对细胞壁结构的影响,尚未得到充分理解。
苜蓿(Medicago sativa L.)是一种多年生豆科牧草,其具有产量高、根系发达、固氮能力强、营养丰富和经济价值高的特点。然而,苜蓿生长受到日益增长的土壤盐碱化的抑制,导致苜蓿产量大幅下降。利用基因工程技术对植物细胞壁进行遗传改良,可以增加植物的生长和对环境胁迫的抵抗力。因此,可以通过鉴定关键的细胞壁改良基因,促进植物生长并提高植物对环境胁迫的抵抗力。
2024年9月16日Plant Journal上线了一篇关于苜蓿耐盐碱机制的研究论文,“MsMIOX2, encoding a MsbZIP53-activated myo-inositol oxygenase, enhances saline–alkali stress tolerance by regulating cell wall pectin and hemicellulose biosynthesis in alfalfa”。该研究揭示了MsMIOX2在盐碱胁迫下对细胞壁果胶和半纤维素生物合成的影响,并鉴定了调控MsMIOX2的上游转录因子MsbZIP53,为阐明苜蓿耐盐碱胁迫的分子机制提供了新的视角。
图1. 盐碱胁迫诱导了苜蓿中MsMIOX2的表达和MIOX的活性
在这项研究中,盐碱胁迫显著上调了苜蓿叶片和根部中的MsMIOX2表达水平,并分别在6小时和24小时达到峰值(图1A)。与MsMIOX2表达一致的是,盐碱胁迫下苜蓿叶片中的MIOX活性显著增加(图1B)。在本氏烟草叶片中的亚细胞定位表明,MsMIOX2是一个定位于核和质膜的蛋白(图1C)。GUS染色的结果显示,MsMIOX2启动子会被盐碱胁迫激活(图1D,E)。这些结果表明MsMIOX2可能参与了盐碱胁迫响应。
图2. 过表达MsMIOX2增强了苜蓿对盐碱胁迫的耐受性
在正常生长条件下,野生型(WT)、MsMIOX2-RNAi和MsMIOX2-OE株系之间没有观察到表型差异。然而,在盐碱胁迫之后,WT的叶片萎蔫且顶端弯曲,而MsMIOX2-OE株系仅表现出轻微的叶片萎蔫和顶端直立。相反,MsMIOX2-RNAi株系表现出严重的叶片萎蔫、坏死以及严重抑制的生长(图2A)。
在盐碱胁迫条件下,过表达株系的株高和鲜重显著高于WT,而基因沉默株系则低于WT(图2B,C)。在对照条件下,MsMIOX2-OE的MIOX活性高于WT,并进一步高于MsMIOX2-RNAi。在盐碱胁迫后,所有植株的MIOX活性均有升高,但相对的活性趋势不变(图2D)。这些结果表明MsMIOX2正向调控苜蓿对盐碱胁迫的抗性。
图3. WT、MsMIOX2-RNAi和MsMIOX2-OE在对照和盐碱条件下的生理指标
进一步的研究表明,MsMIOX2的过表达在盐碱胁迫下正面调节了苜蓿的抗氧化系统和光合作用。
图4. MsMIOX2在盐碱条件下影响了细胞壁中果胶和半纤维素的生物合成及细胞壁厚度
同时,MsMIOX2表现出的肌醇氧合酶活性,增加了多糖含量,促进了果胶和半纤维素的生物合成,并增加了细胞壁厚度。然而,MsMIOX2的RNAi株系中减少了细胞壁厚度,从而降低了苜蓿对盐碱胁迫的耐受性。
图5. MsbZIP53结合并激活了MsMIOX2的启动子
此外,通过酵母单杂交、电泳迁移率变化分析、双荧光素酶和β-葡糖醛酸酶分析,鉴定了MsbZIP53作为MsMIOX2的上游转录调控因子。
图6. MsbZIP53通过激活MsMIOX2的表达正面调节了苜蓿的盐碱胁迫耐受性
MsbZIP53的过表达会增加MsMIOX2的表达,从而提高了MIOX的活性,加强了抗氧化系统和光合作用,并增强了苜蓿对盐碱胁迫的耐受性。
图7. MsMIOX2在盐碱胁迫下的工作模型

总之,该研究为阐明苜蓿耐盐碱胁迫的分子机制提供了新的视角,并强调了MsMIOX2在苜蓿育种中的潜在应用。


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