肿瘤相关的Tregs过表达CD74
通过分析来自非小细胞肺癌（NSCLC）患者的CD4+T常规（Tconv）和Treg细胞的单细胞RNA测序（scRNAseq）数据集，研究者发现，与肿瘤Tconvs相比，在肿瘤Treg中差异表达显著较高的基因中，观察到与活化的肿瘤Tregs相关的基因，如CD25、HLA-DR、CTLA-4和CCR8，以及CD74。与血液Tregs和血液和肿瘤Tconvs相比，肿瘤Tregs过表达CD74。通过流式细胞术分析NSCLC患者的血液和肿瘤样本Tregs和Tconvs表面的CD74表达水平，发现很少有血液和肿瘤Tconvs以及血液Tregs在表面表达CD74，而6%至22%的肿瘤表达Tregs。
体外CD74缺乏不影响Tregs的存活，表型和抑制能力
通过CRISPR-Cas9技术在Tregs上敲除CD74基因，使用流式细胞术检测CD74缺失后的表达情况，发现70-90%的Tregs在电穿孔后4天失去CD74蛋白表达。CD74的缺失对于体外Treg增殖、激活和抑制功能没有影响。
缺乏CD74的Tregs保留了抑制功能
使用异种移植物抗宿主病（GvHD）模型评估CD74对体内Treg抑制活性的需求，在该模型中，GvHD是通过将人PBMC注射到NSG免疫缺陷小鼠中来诱导的，并且共同注射Tregs限制了效应T细胞的激活，从而减轻了该疾病的临床症状。通过跟踪血液中注射的expTreg动力学，发现从注射后第4天到第8天，血液中检测到WT和CD74KO Tregs，并呈现相似的动态。仅接受PBMCs的小鼠从第20天左右开始出现严重的GvHD（体重减轻超过20%），而同时注射WT或CD74KO expTregs延迟了临床症状的出现。缺乏CD74的Tregs对异种GvHD的控制程度与WT Tregs相似，表明CD74对于GvHD模型体内Treg抑制活性是可有可无的。
CD74稳定肿瘤内Tregs的抑制性表型
研究者将MDA-MB231三阴性乳腺癌细胞移植到NSG小鼠中，在第10天，当肿瘤可触及时，小鼠不进行治疗（对照组）或单独注射新鲜PBMCs或与体外扩增WT或CD74KO Tregs（expTregs）共同注射。对照小鼠中，肿瘤呈指数增长，注射PBMCs导致肿瘤排斥反应，WT expTregs的加入略微延迟了肿瘤的消除，但是CD74KO expTregs显著加速了肿瘤排斥反应。表明Tregs中CD74的表达是Tregs维持其在肿瘤中的抑制功能所必需的。
Foxp3在Treg中的表达缺失与Treg表型不稳定有关，分析不同条件下Foxp3的几何平均值，移植后6天脾脏CD74KO Tregs中的几何平均值略低。与脾脏相比，WT Tregs在肿瘤中显示Foxp3水平显著升高，相反肿瘤浸润的CD74KO Tregs显示Foxp3表达显著下降。这些结果表明，在某些炎症条件下，需要CD74来确保Treg的稳定性。在单独的tuSN或与IL-12存在的情况下，Treg的激活诱导CD74KO中的细胞凋亡，但在WT Tregs中则不然，这表明CD74有助于在肿瘤衍生的可溶性因子存在下增加Treg的存活。研究人员发现tuSN与IL-12一起孵育诱导了最高的IFNγ产量，在CD74KO Tregs中观察到最大增加，表明CD74在TME中Treg抑制功能的保存中发挥着至关重要的作用。CD74在保持TSDR去甲基化中起调节作用，并为CD74介导的Tregs中Foxp3稳定性的维持提供了分子基础。
CD74有利肿瘤浸润并维持Foxp3水平
研究发现CD74可以调控Tregs的迁移能力以及Treg的大小和细胞骨架收缩性。使用移植了B16-F10黑色素瘤细胞的免疫活性C57BL/6小鼠，肿瘤Treg中CD74的表面表达高于外周Tregs，也高于肿瘤和外周CD4+Tconvs和CD8+T细胞。将从CD45.1WT或CD45.2CD74完全KO小鼠中分选的CD4+CD25 high Treg共注射到MCA肿瘤荷瘤Rag-KO小鼠中，与脾脏相比，肿瘤中的KO/WT Treg比率略低，并且伴随着Foxp3水平的显著下降，这些结果表明CD74在肿瘤中Tregs积累中具有潜在作用。
小结
Tregs是肿瘤免疫排斥的主要屏障，因为它们诱导肿瘤免疫耐受并促进肿瘤血管生成。选择性地消耗或抑制肿瘤中的Tregs并保留健康组织中的Tregs（维持免疫稳态所需）是消除肿瘤的可行策略，与其他免疫疗法联合使用效果会增强。研究人员发现CD74KO Tregs在肿瘤内的肌动蛋白细胞骨架组织和细胞内细胞器中表现出缺陷，导致激活减少，Foxp3表达降低，肿瘤积累减少。在临床前模型中，CD74KO Tregs与加速肿瘤排斥有关，突出了CD74在肿瘤浸润性Tregs中的特定作用。减少CD74表面表达可以抑制Treg在肿瘤中的积累，CD74可能是调节肿瘤Tregs的潜在治疗靶标。
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