绿茶是我国六大茶类之一,因其滋味鲜爽和香气浓郁而广受消费者的喜爱。绿茶的基本工艺主要包括杀青、揉捻和干燥,加工技术是决定茶叶品质的关键。代谢组学是继基因组学、转录组学和蛋白质组学之后的一种新兴科学技术,一般来说,研究的对象是相对分子质量在1000以下的小分子化合物,研究手段涵盖了核磁共振技术、气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术和液相色谱-质谱(LC-MS)联用技术。目前非靶向代谢组学被广泛应用到茶叶的研究中,为全面深入地了解茶叶提供了有力帮助。
信阳毛尖茶具有“细圆紧直多白毫,香高味浓汤色绿”的品质特征,属于名优炒青绿茶的代表产品,优越的地理位置、适宜生态环境以及优良的茶树品种和独特的加工技艺决定了其独特的风味和功效。信阳农林学院茶学院的孔亚帅、尹鹏*、郭桂义*等以信阳毛尖茶为对象,利用非靶向代谢组学技术结合多元统计分析对信阳毛尖茶加工过程中的非挥发性代谢物进行研究,以探明信阳毛尖茶加工过程中的关键代谢物,为进一步完善信阳毛尖茶品质形成机理及其调控提供理论参考。
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在正离子模式下共检测并比对数据库鉴定到1000 种代谢物,为更好地了解信阳毛尖茶在加工过程中代谢物的变化,基于Bray-Curtis算法对正离子模式下采集到的代谢物进行PCoA和HCA,如图2所示,每个节点代表一个样品,颜色由深到浅表示信阳毛尖茶加工工艺流程,节点的大小代表不同分组;信阳毛尖茶加工过程样品以杀青工艺为界限分为两组,一组为杀青前(Cluster-1,酶促反应阶段),包括茶鲜叶样品和摊放后样品;另一组为杀青后(Cluster-2,非酶促反应阶段),包括杀青后样品、揉捻后样品、排把后样品、理条后样品以及干燥后样品。根据无监督下分组结果,经R语言vegan包PERMANOVA验证(R2=33.6%,P<0.01),证明分组结果合理,两组样品有显著性差异。
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针对检测鉴定到的1 000 种代谢物,分析它们在信阳毛尖茶加工过程中的变化规律,得到代谢物的火山图(图3)。图中节点的大小代表了OPLS-DA结果变量重要性投影分析值(VIP)的大小,蓝色节点、红色节点和灰色节点分别代表杀青后相对含量显著上升(P<0.05且差异倍数(foldchange,FC≥2))、显著下降(P<0.05且FC≤0.5)以及无显著变化的化合物。信阳毛尖茶加工过程中杀青工序导致147 个化合物发生显著变化(101 个显著上升,46 个显著下降);摊放、揉捻、排把、理条、干燥工序分别导致16(4 个显著上升,12 个显著下降)、13(均显著下降)、16(均显著上升)、2(均显著上升)、8 个(2 个显著上升,6 个显著下降)化合物发生显著变化;相较于信阳毛尖茶加工过程中的其他工序,非挥发性代谢物的变化主要发生在杀青工序中,这表明杀青对于高品质绿茶的形成至关重要。
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3.1 氨基酸及其衍生物
从图4可以看出,L-谷氨酸(ID:50)的相对含量在杀青后显著降低;L-酪氨酸(ID:212)和L-苯丙氨酸(ID:43)在杀青后其相对含量显著上升;另外还有3 个氨基酸衍生物包括甜菜碱(ID:7)、β-尿嘧啶-3-丙氨酸(ID:353)和葡萄糖半乳糖苷羟基赖氨酸(ID:45)的相对含量在在杀青后也显著上升。前期研究表明在杀青后L-焦谷氨酸和一些氨基酸糖苷的含量显著上升,本研究中L-谷氨酸相对含量的显著下降可能与此有关。茶叶中的苯丙氨酸可以通过氧化脱氨和脱羧转化为具有玫瑰花香味的香气成分苯乙醛和苯乙醇,杀青后L-苯丙氨酸的积累可能为后续绿茶香气的形成提供前体物质。
3.2 黄酮糖苷类化合物
3.3 类黄酮化合物
筛选出2 个黄烷-3-醇类,包括EGC(ID:110)和ECG(ID:173),二者的相对含量在杀青后都显著上升;表儿茶素-(4β->8)-表没食子儿茶素3-O-没食子酸酯(ID:1059)在杀青后相对含量也有明显增加;另外1 个黄酮醇类化合物山柰酚(ID:17)和1 个简单茶黄素(ID:314)的相对含量在杀青后却呈现显著下降的趋势。本实验研究结果与前期研究存在差异的原因可能是由于儿茶素类化合物在热处理过程中同时存在异构化反应,部分儿茶素的变化影响了信阳毛尖茶的苦涩口感。
3.4 脂类化合物
3.5 嘌呤核苷酸类化合物
3.6 有机酸及其衍生物
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对信阳毛尖茶加工过程杀青前后样品差异化合物的KEGG注释结果进行KEGG通路富集分析。如图6所示,图中每一个点表示一个KEGG通路,点的大小代表该通路富集差异化合物的数量,点的颜色代表富集显著性,横坐标为富集因子,纵坐标轴为通路名称。20 条代谢通路分别为丙烷、哌啶和吡啶生物碱的生物合成,嘌呤代谢,磷脂酰肌醇信号系统,苯丙素的生物合成,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,苯丙氨酸代谢,泛酸盐和辅酶A生物合成,代谢途径,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,甘油磷脂代谢,甘油脂代谢,芥子油苷生物合成,类黄酮生物合成,黄酮和黄酮醇的生物合成,油菜素甾醇生物合成,莽草酸途径衍生生物碱的生物合成,鸟氨酸、赖氨酸和烟酸衍生生物碱的生物合成,β-丙氨酸代谢,氨酰基-tRNA生物合成,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢。差异化合物数量较多的富集代谢途径是代谢途径(18 个,78.26%)、嘌呤代谢(5 个,21.74%)以及氨酰基-tRNA生物合成(3 个,13.04%)、甘油磷脂代谢(3 个,13.04%)、苯丙氨酸代谢(3 个,13.04%)。
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讨论
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结论
本研究基于非靶向代谢组学的方法对信阳毛尖茶加工过程中非挥发性代谢物进行了系统的分析,在正离子模式下共检测并比对数据库鉴定到1 000 种化合物,这些化合物的变化主要发生在杀青步骤中,共有147 种代谢物发生显著变化,杀青对信阳毛尖茶加工过程非挥发性代谢物的影响大于其他工序。多元统计分析结果显示信阳毛尖茶整个加工过程可以分为两个阶段,即杀青前(酶促反应阶段)和杀青后(非酶促反应阶段),两组之间共筛选出53 个差异化合物,包括氨基酸、儿茶素、黄酮糖苷、脂质、嘌呤核苷、有机酸等;其中酰化黄酮糖苷、溶血磷脂酰类、嘌呤核苷类化合物在杀青后相对含量显著提升,可能是信阳毛尖茶加工过程中的标志化合物,这进一步挖掘了影响信阳毛尖茶品质和功效的主要代谢物。非靶向代谢组学分析技术更加全面细致地揭示了信阳毛尖茶加工过程中代谢物整体特征,进一步加深了对信阳毛尖茶品质和风味成分的了解,在将来的工作中有必要对代谢组学分析出的差异化合物进行更深一步的定量分析,探究其与品质和风味的相关性,为深刻揭示信阳毛尖茶风味和品质形成机制提供依据和参考。
作者简介
郭桂义,二级教授,河南省豫南茶树资源综合开发重点实验室主任,享受国务院特殊津贴,2018-2022年教育部高等学校植物生产类教学指导委员会园艺(含茶学)教学指导分委员会委员,教育部高等学校教学名师奖,河南省高层次人才特殊支持“中原千人计划”中原领军人才中原教学名师,全国技术能手(评茶师),河南省优秀专家,国家级技能大师(评茶员)工作室领办人,中国茶叶学会常务理事、茶叶感官审评与检验专业委员会副主任委员,河南省高等学校黄大年式教师团队负责人,河南省茶产业技术创新战略联盟秘书长和专家委员会主任委员,主持制定国家标准GB/T 22737-2008《地理标志产品 信阳毛尖茶》、河南省地方标准DB41/T 2548-2023《信阳毛尖茶手工炒制技术规程》、供销合作行业标准GH/T 1248-2009《信阳红茶》和GH/T 1445-2023《桐柏玉叶茶》,编著出版《信阳历史文化丛书·茶叶卷》,副主编《茶叶标准与法规》《中华茶史》,发表学术论文100多篇。
本文《基于非靶向代谢组学的信阳毛尖茶加工过程非挥发物代谢轮廓分析》来源于《食品科学》2024年45卷第5期102-110页,作者:孔亚帅, 陈凌芝, 成恩, 等。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20230824-188。点击下方阅读原文即可查看文章相关信息。
责任编辑:张睿梅。点击下方阅读原文即可查看全文。图片来源于文章原文及摄图网。
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