摘要：目的:为制定4种辽宁产道地药材北五味子、北苍术、龙胆、白鲜皮的质量标准提供参考。方法:对4种辽宁产药材各10批，进行显微鉴别及TLC法定性鉴别；按照《中华人民共和国药典》2020年版所载方法对其水分、灰分、浸出物进行测定；采用HPLC法分别测定五味子中五味子醇甲含量、北苍术中苍术素含量、龙胆中龙胆苦苷的含量以及白鲜皮中白鲜碱、梣酮和黄柏酮的含量，并制定其限度。结果:4种药材粉末的显微鉴别与薄层鉴别特征显著，该研究对4种药材检查项、浸出物项以及含量测定项规定了限度。结论:该研究符合道地药材质量控制要求，为4种药材等级标准的建立及实现优质优价提供了依据。

关键词：辽宁道地药材;质量标准;TLC;HPLC;

辽宁省药材资源丰富，地方习用品种繁多，其中北五味子、北苍术、龙胆为辽宁道地药材，近年来辽宁亦成为白鲜皮药材的主要种植基地。开展对辽宁道地药材的深入研究有助于促进当地道地药材的开发和利用，助力辽宁经济的发展。北五味子来源于木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill．的干燥成熟果实，《辽宁植物志》收载其为“五味子”，产于本溪、凤城等地，有增强肝抗损伤能力，及强心、增强免疫功能等作用[1]。北苍术来源于菊科植物北苍术Atractylodes chinensis(DC.)Koidz．的干燥根茎，《辽宁植物志》收载其为“北苍术”，产于建平、建昌等地，具有燥湿健脾、祛风散寒、明目之功效[2]，北苍术含有苍术素、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、β-桉叶油醇等有效成分，其中苍术素具有降血糖、利尿、促进胃排空、抗炎、抗肿瘤等药理活性[3]。龙胆为龙胆科植物龙胆Gentiana scabraBge．的干燥根和根茎，广泛分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古等省区[4]，具有清热燥湿、泻肝胆火之功效[5]，龙胆含有龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、当药苷、马钱苷酸、异荭草素等化学成分[6]，其中主要的化学成分龙胆苦苷，具有抑制炎症反应、抗氧化应激、抗纤维化、抗细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖等多种药理作用[7]。白鲜皮为芸香科植物白鲜Dictamnus dasycarpusTurcz．的干燥根皮，《辽宁植物志》收载其为“白鲜”，产于凌源、建平等地，现代研究表明其在皮肤科方面有清热解毒、除湿止痒之功效[8]，可用于治疗足癣、扁平疣、皮肤瘙痒、荨麻疹、湿疹等皮肤病[9]。

自中华人民共和国成立以来，辽宁省依据当地习用中药材的用药历史、省内分布、资源利用等情况，先后颁布了1980年版和1987年版《辽宁省中药材标准》作为省内生产、经营和使用中药材的质量标准[10]，目前采用的《辽宁省中药材标准》第二册（2019年版）中，收载有29个品种，其中北五味子、北苍术、龙胆、白鲜皮作为辽宁省道地药材一直按照《中华人民共和国药典》标准执行。为更好地规范辽宁产中药材的品质，本实验从显微鉴别、薄层鉴别、含量测定、水分、浸出物、灰分等对北五味子、北苍术、龙胆和白鲜皮这4味药材进行质量标准提升研究，并与2020年版《中华人民共和国药典》进行对比分析，补充了白鲜皮含量测定项中白鲜碱的含量限度，同时增加了白鲜皮杂质、总灰分检查项，补充了北五味子和北苍术的水冷浸物项，其中北五味子、北苍术的水分限度、龙胆的酸不溶性灰分限度比《中华人民共和国药典》规定低，北五味子中五味子醇甲的含量以及龙胆水热浸出物限度和龙胆苦苷含量比《中华人民共和国药典》规定高。

1 材料

D106B生物显微镜（Murzider迈时迪公司）；Agilent 1290高效液相色谱系统（美国安捷伦公司），四元低压梯度泵及DAD检测器（美国安捷伦公司）；A200S电子分析天平（德国赛多利斯公司）；SX-2.5-12型箱式电阻炉（天津市泰斯特仪器有限公司）；ZS-201A水分测定仪（深圳市速赛电子科技有限公司）；KQ5200DE超声清洗机（昆山市超声仪器有限公司）；DFT-300小型粉碎机（温州顶力医疗器械有限公司）；101-2A电热鼓风干燥箱（天津泰斯特仪器有限公司）。

对照品：五味子醇甲（110857-201815）、五味子甲素（110764-201915）、苍术素（111924-201806）、龙胆苦苷（110770-202219）、白鲜碱（111654-200602）、黄柏酮（111923-202105）、梣酮（111700-202004）；对照药材：北五味子（120922-201610）、北苍术（120983-202106）、龙胆（121530-201602）、白鲜皮（120978-202006），均购自中国食品药品鉴定研究院。色谱纯甲醇及分析纯甲醇均为天津科密欧有限公司生产；实验用水为娃哈哈纯净水。采集辽宁省内不同产地的北苍术、北五味子、龙胆、白鲜皮各10批（表1），分别经辽宁中医药大学药学院尹海波教授鉴定为菊科植物北苍术Atractylodes chinensis(DC.)Koidz．的干燥根茎、木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill．的干燥成熟果实、龙胆科植物龙胆Gentiana scabraBge．的干燥根和根茎、芸香科植物白鲜Dictamnus dasycarpusTurcz．的干燥根皮。

表1 辽宁产各10批4种药材来源

2 方法与结果

2.1 显微鉴别

参照2020年版《中华人民共和国药典》中4种药材的显微鉴别方法，其显微特征均符合规定。

2.2 薄层色谱鉴别与各项检查

2.2.1 各供试品溶液的制备

北五味子、北苍术、龙胆和白鲜皮各10批药材参照2020年版《中华人民共和国药典》制备供试品溶液。

2.2.2 各对照药材提取液和对照品溶液的制备

北五味子和北苍术参照2020版《中华人民共和国药典》所载方法制备对照药材溶液和对照品溶液。龙胆：同供试品法制成对照药材溶液；精密称取龙胆苦苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。白鲜皮：同供试品法制成对照药材溶液；精密称取白鲜碱对照品、黄柏酮对照品和梣酮对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 薄层展开与检视

依照2020年版《中华人民共和国药典》四部薄层色谱法（通则0502）进行试验，4种药材的薄层色谱在与对照药材和对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。见图1。

图1 四种辽宁产道地药材TLC色谱

2.2.4 杂质、水分、灰分、浸出物检查

依照2020年版《中华人民共和国药典》的方法对4味药的杂质、水分、灰分、浸出物进行测定，其中杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分限度参照平均值的120%计算，水冷浸出物、水热浸出物参照平均值的80%计算，结果见表2-表5。

表2 北五味子检查项和浸出物项测定结果

(%)

表3 北苍术检查项和浸出物项测定结果

(%)

表4 龙胆检查项和浸出物项测定结果

(%)

表5 白鲜皮检查项和浸出物项测定结果

(%)

2.3 HPLC含量测定项

2.3.1 色谱条件

白鲜皮：色谱柱：Agilent HC-C18色谱柱（4.6mm×5μm×250mm）；流动相：甲醇：水（55:45）；流速：1.0mL·min-1；柱温：40℃；进样量：10μL；检测波长：236nm；理论塔板数以梣酮色谱峰计算应不少于3 000。北五味子、北苍术、龙胆的色谱条件同2020年版《中华人民共和国药典》。

2.3.2 对照品溶液的制备

白鲜皮：取梣酮、黄柏酮、白鲜碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含梣酮25μg、黄柏酮0.12mg、白鲜碱15μg的混合溶液，即得混合对照品溶液。北五味子：取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含五味子醇甲50μg的溶液，即得对照品溶液。龙胆：取龙胆苦苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得对照品溶液。北苍术：取苍术素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含4μg的溶液，即得对照品溶液。

2.3.3 标准曲线溶液的制备

白鲜皮：取梣酮、黄柏酮、白鲜碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含梣酮99μg、黄柏酮0.25mg、白鲜碱55.8μg的混合对照品溶液，并依次按照2、4、10、20倍稀释成浓度梯度。北五味子：取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇配置成浓度为501.5μg/mL的对照品溶液并依次按照2、5、10、20、50倍稀释成浓度梯度。龙胆：取龙胆苦苷对照品适量，精密称定，加甲醇配置成浓度为503.5μg/mL的对照品溶液并依次按照2、4、10、20、40倍稀释成浓度梯度。北苍术：取苍术素对照品适量，精密称定，加甲醇配置成浓度为40μg/mL的对照品溶液，并依次按照2、4、10、20、40倍稀释成浓度梯度。

2.3.4 供试品溶液的制备

北五味子：取本品粉末（过三号筛）约0.25g，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇约50mL，超声处理（功率250W，频率20kHz)20min，取出，摇匀，滤过，取续滤液，用0.22μm有机微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。龙胆：取各产地龙胆药材粗粉（过四号筛）0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，称定质量，加热回流15min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，滤液备用，精密量取滤液1mL，置20mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.22μm有机微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。白鲜皮和北苍术的供试品溶液制备同2020年版《中华人民共和国药典》。

2.3.5 线性关系考察

将“2.3.2”项下配置好的系列梯度浓度对照品溶液，按“2.3.1”项下的色谱条件进行测定，记录峰面积（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标，进行线性回归，结果见表6。

表6 4种药材共6种成分的回归方程、相关系数及线性范围

2.3.6 方法学考察

(1）精密度试验。分别精密吸取同一份白鲜皮、北五味子、龙胆、北苍术供试品溶液，各供试品重复进样5次，分别计算白鲜碱、黄柏酮、梣酮、五味子醇甲、龙胆苦苷及苍术素含量的RSD值为0.04%、0.13%、0.04%、0.17%、0.60%及0.32%，表明仪器精密度良好。

(2）稳定性试验。分别取4种药材同一份供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12h进样测定，结果白鲜皮中白鲜碱、黄柏酮、梣酮含量的RSD值为0.30%、0.42%、0.30%；五味子中五味子醇甲含量的RSD值为2.18%；龙胆中龙胆苦苷含量的RSD值为0.65%；北苍术中苍术素含量的RSD值为0.43%，表明各样品溶液在12h内稳定性良好。

(3）重复性试验。分别取同一批次4种药材，各平行制备供试品6份，按照供试品方法制备样品进行含量测定，结果白鲜皮中白鲜碱、黄柏酮、梣酮含量RSD值分别为2.23%、1.33%、2.18%；五味子中五味子醇甲含量的RSD值为1.25%；龙胆中龙胆苦苷含量的RSD值为1.05%；北苍术中苍术素含量的RSD值为2.35%，表明所有方法重复性良好。

2.3.7 样品测定

按“2.3”项下白鲜皮、北五味子、龙胆、北苍术供试品制备方法及色谱条件，对上述4种药材各10批共6种成分的含量进行测定，含量平均值最低80%，计算结果见表7。以干燥品计算各药材中化学成分含量限度，建议白鲜皮药材中白鲜碱含量不少于0.04%，黄柏酮含量不少于0.15%，梣酮含量的不少于0.05%；北五味子药材中五味子醇甲的含量不少于0.9%；龙胆药材中龙胆苦苷的含量不少于3.1%；北苍术药材中苍术素的含量不少于0.3%。

表7 4种药材各10批样品含量测定结果

(%)

3 讨论

在薄层色谱鉴别实验中，北苍术与北五味子添加了对照药材。对照药材[11]作为国家法定的药品检验对照物质，对中药材检验的规范化、重现性具有重要作用。因此，本研究在白鲜皮和龙胆的薄层色谱项上添加了对照药材部分，实验结果表明药材鉴别特征显著。

在应用高效液相色谱进行含量测定的试验中，4种药材的提取方式与2020版《中华人民共和国药典》一致。白鲜皮含量测定项，作为其三大主成分之一的白鲜碱未被纳入其中，现代药理学研究表明，白鲜碱具有良好的抗炎、抗菌和抗癌作用[12]。因此本研究将白鲜碱一并纳入白鲜皮药材的质量控制并对其色谱柱型号进行考察，分别采用Diamonsil-C18(4.6mm×5μm×200mm）及Agilent HC-C18(4.6mm×5μm×250mm）色谱柱进行实验，结果发现，采用Diamonsil-C18色谱柱，白鲜皮药材中3种成分峰分离度<1.5，而同样色谱条件下，采用Agilent HC-C18色谱柱可实现基线完全分离，进一步对白鲜皮含量测定流动相进行考察，分别采用甲醇:水（70:30、60:40、55:45）进行实验，结果发现当流动相为甲醇:水=55:45时，白鲜皮3个主要成分峰峰型较好，分离度>1.5，故选用其作为白鲜皮中主要成分含量测定的流动相。在进行龙胆药材中龙胆苦苷的测定时，Agilent HC-C18色谱柱中色谱峰峰宽较宽，柱效低于3 000，采用Diamonsil-C18色谱柱后色谱图符合系统适应性条件，而北苍术与北五味子药材在两种色谱柱中的色谱行为没有明显差异，故选择Diamonsil-C18色谱柱进行实验。此外，实验发现，按照2020版《中华人民共和国药典》各药材含量测定项下供试品制备方法制备药材，进行HPLC含量测定时，北五味子甲素及龙胆苦苷色谱峰面积较大，峰形不尖锐。为得到稳定、准确的测定结果及保护仪器和色谱柱，本实验样品制备在2020版《中华人民共和国药典》基础上对五味子稀释了2.5倍、龙胆稀释了20倍。本研究对辽宁省本土所产的4种药材进行了一系列基于药典的检查和测定，制定了符合辽宁省4种药材特点的质量标准，专属性较强，为以后划区种植提供了参考依据。

参考文献（略）

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排版：陈金秋     审核：蒋涵如  

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