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1范围
本标准规定了用于内镜消毒的消毒剂和清洗消毒机(简称消毒机)的消毒效果的评价原则和试验方法。
本标准适用于内镜消毒的消毒剂和消毒机消毒效果的评价。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB28232臭氧发生器安全与卫生标准
GB28234酸性氧化电位水生成器安全与卫生标准
GB/T38502消毒剂实验室杀菌效果检验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1内镜
一种具有图像传感器、光学镜头、光源照明、机械装置等，可以经口腔进入胃内或经其他天然孔道进入体内的诊疗设备。
3.2内镜消毒剂
用于内镜消毒并能达到消毒效果的化学制剂。
注：包括商品化的消毒剂与即产即用的消毒剂。
4缩略语
下列缩略语适用于本文件。
CFU菌落形成单位(ColonyFormingUnit)
5评价原则
5.1检测要求
5.1.1内镜消毒剂的消毒效果鉴定
应做实验室试验和模拟现场试验。
5.1.2内镜消毒机的消毒效果鉴定
自产消毒剂的，应做实验室试验、模拟现场试验。
外带消毒剂的，消毒剂应符合我国消毒产品管理的相关规定，应进行实验室试验，试验结果应符合5.2.1.1的要求，同时消毒机应做模拟现场试验。
5.2评价指标
5.2.1杀灭微生物指标
5.2.1.1实验室试验杀灭微生物指标
实验室试验杀灭微生物指标见表1。
表1实验室试验杀灭微生物指标
5.2.1.2模拟现场试验杀灭微生物指标
模拟现场试验杀灭微生物指标见表2。
5.2.2酸性氧化电位水和臭氧消毒的消毒效果评价
酸性氧化电位水和臭氧用于内镜消毒时，其消毒效果评价应分别按照GB28234、GB28232的规定。
5.3结果判定
5.3.1消毒剂合格判定标准
在消毒剂、消毒机说明书中的最短作用时间、最低作用浓度、最低温度下，实验室试验、模拟现场试验结果均应符合5.2.1.1、5.2.1.2的要求；连续使用模拟试验按说明书中的使用方法连续使用最长时间及最多次数后，实验室试验结果应符合5.2.1.1的要求。
5.3.2消毒机合格判定标准
5.3.2.1自产消毒剂的消毒机
在消毒剂、消毒机说明书中的最短作用时间、最低作用浓度、最低温度下，实验室试验、模拟现场试验结果均应符合5.2.1.1、5.2.1.2的要求。
5.3.2.2外带消毒剂的消毒机
在消毒剂、消毒机说明书中的最短作用时间、最低作用浓度、最低温度下，消毒剂应符合我国相关规定，应符合5.2.1.1的要求；消毒机应做模拟现场试验，应符合5.2.1.2的要求。连续使用模拟试验按说明书中的使用方法连续使用最长时间及最多次数后，实验室试验结果应符合5.2.1.1的要求。
6试验方法
6.1实验室试验
6.1.1试剂、培养基、器材
6.1.1.1实验菌种
金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、龟分枝杆菌脓肿亚种(ATCC19977)、大肠杆菌(8099)、铜绿假单胞菌(ATCC15442)、枯草杆菌黑色变种(ATCC9372)、脊髓灰质炎病毒Ⅰ型(PV-Ⅰ)疫苗株,根据消毒剂特定用途或试验特殊需要，可增选其他菌株。
6.1.1.2试验器材
0.3%牛血清白蛋白、中和剂，恒温培养箱、Ⅱ级生物安全柜等。
6.1.2中和剂鉴定试验
按GB/T38502规定进行。
6.1.3定量杀灭试验
按GB/T38502规定进行。
6.1.4病毒灭活试验
按GB/T38502规定进行。
6.2模拟现场试验
6.2.1试验器材
6.2.1.1试验菌株:铜绿假单胞菌(ATCC15442)、枯草杆菌黑色变种芽孢(ATCC9372)和龟分枝杆菌脓肿亚种(ATCC19977)；根据特定用途或试验特殊需要，可增选其他菌株。
6.2.1.2消毒剂、中和剂、稀释液：胰蛋白胨生理盐水溶液(TPS)、0.3%牛血清白蛋白等。
6.2.1.3模拟内镜:聚四氟乙烯管,外径10mm,内径6mm,总长度2000mm,分别在50mm,1000mm,1950mm处剪断，共分为4截，其内壁能与载体外壁紧密相套连接。
6.2.1.4载体：聚四氟乙烯管(外径6mm，内径4mm，长度30mm)经脱脂处理高压灭菌后备用。
6.2.1.5蠕动泵:可调节流速,有单个或多个通道,驱动器转速在1r/min~100r/min。
6.2.2试验步骤
6.2.2.1染菌载体的制备
取0.02mL芽孢液/菌悬液滴染于聚四氟乙烯管载体内壁，涂抹均匀，置37℃培养箱中干燥30min备用.
6.2.2.2染菌模拟内镜的制备
试验时，先将模拟内镜体在50mm、1000mm和1950mm处剪开，取染菌载体分别连接在50mm、1000mm和1950mm处,将染菌载体分别连接在灭菌后的模拟内镜50mm、1000mm和1950mm处，连接处用封口膜密封。
6.2.2.3清洗消毒程序
6.2.2.3.1浸泡消毒程序
将染菌模拟内镜完全浸没在消毒剂中，染菌模拟内镜一端与蠕动泵连接，以0.1L/min~0.2L/min的流速，进行流动浸泡消毒，按消毒剂使用说明书的规定浸泡至作用时间。
6.2.2.3.2机械自动清洗程序
将模拟内镜体装放于清洗消毒机内规定的位置，按照供应商提供的说明书规定的程序运行。
6.2.2.4细菌菌落计数
消毒处理完毕后，用灭菌镊子将染菌载体取出，分别置于含有10mL中和剂溶液的试管内，敲打200次，分别吸取洗脱液1.0mL接种平皿，每份样本接种两个平皿。
阳性对照组，取2个染菌载体，放置室温环境中，不做消毒处理，待试验组处理至最长作用时间，将染菌载体置于含有10mL中和剂溶液的试管中，敲打200次，用稀释液做10倍系列稀释，选适宜稀释度的悬液，分别吸取1.0mL接种平皿，每份样本接种两个平皿，同时分别吸取试验用中和剂和稀释液各1.0mL接种平皿，每份样本接种两个平皿，作为阴性对照组。各组接种平皿后，倾注15mL~20mLTSA(胰蛋白胨大豆琼脂培养基)，待凝固后，置37℃培养箱内，细菌芽孢培养72h，细菌培养48h，计数菌落数，试验重复3次，计算杀灭对数值。
6.2.3结果判定
内镜清洗消毒机模拟现场消毒时，在规定的作用时间内，3次试验均达合格要求，阳性对照组有菌生长，阴性对照组无菌生长，且铜绿假单胞菌回收的菌落数达载体1×10⁷CFU/载体~5×10⁷CFU/载体,枯草杆菌黑色变种芽孢、龟分枝杆菌脓肿亚种的回收的菌落数达1×10⁴CFU/载体~5×10⁴CFU/载体。试验重复3次，计算各组的活菌浓度(CFU/载体)，并换算为对数值，然后按公式(1)计算杀灭对数值：
式中：
KL----杀灭对数值;
N。----对照组平均活菌浓度的对数值；
NX----试验组平均活菌浓度的对数值。
6.3连续使用模拟试验
每天将3条模拟内镜浸泡于按产品说明书规定的足够量的消毒液中，取出模拟内镜，洗净晾干，连续浸泡至说明书规定最长时间及最多次数后进行杀灭微生物(选用抵抗力最强的)试验。试验按照6.2进行。试验重复3次。
免费下载链接：
https://pan.quark.cn/s/be6801a6376e
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