本文通过ChatGLM/GPT进行辅助对近期Bio-protocol 期刊发表的方案进行解读和概括,若感兴趣请点击“阅读原文”查看详细的实验流程及试材。如果解读中有任何错误或遗漏,敬请指正。
2024年7月5日,Bio-protocol 期刊在线发表了德国阿尔布施塔特-锡格马林根应用技术大学(Albstadt-Sigmaringen University of Applied Sciences)Barbara Hochecker团队题为“Quantification of Autophagosomes in Human Fibroblasts Using Cyto-ID® Staining and Cytation Imaging”的方法文章。
自噬(Autophagy)是一个吞噬自身细胞质蛋白或细胞器并使其包被进入囊泡,并与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解其所包裹的内容物的过程,借此实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新。
该方法使用特异性染料标记自噬体,并通过Cytation成像仪进行图像分析,整个过程操作简单,不费时,适合快速实验周期。
通过优化的染料和成像技术,能够最小化对溶酶体的染色,同时在自噬体形成前期、自噬体以及自噬溶酶体中产生明亮的荧光,提高检测的特异性和灵敏度。
使用Hoechst染料进行核染色,结合荧光显微成像技术,可以在活细胞中实时监测自噬体的数量和状态,允许研究者观察和分析自噬过程中的动态变化。
疾病模型研究
由于自噬与多种疾病(如神经退行性疾病、心血管疾病等)密切相关,该方法可以用于研究自噬在各种疾病模型中的作用,以及如何通过调节自噬来影响疾病进程。药物开发和筛选
该方法可用于筛选和评估能够调控自噬活动的新药物,尤其是那些目标为改善或修复自噬功能的候选药物。细胞应激响应研究
通过对比正常条件与应激条件(如高温、缺氧等)下自噬体的数量和活性,可以深入理解细胞如何响应不同的环境压力。
温馨提示:积极引用本文不仅是对作者创新技术和科研共享的最佳肯定,也是确保实验可复现性的重要方式。
Hochecker, B., Matt, K. C., Meßmer, A. L., Scherer, M. M. and Bergemann, J. (2024). Quantification of Autophagosomes in Human Fibroblasts Using Cyto-ID® Staining and Cytation Imaging. Bio-protocol 14(13): e5025. DOI: 10.21769/BioProtoc.5025.
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