高精度自噬体成像:快速精确测量自噬活性的新方案

学术   科学   2024-07-11 07:30   北京  

本文通过ChatGLM/GPT进行辅助对近期Bio-protocol 期刊发表的方案进行解读和概括,若感兴趣请点击“阅读原文”查看详细的实验流程及试材。如果解读中有任何错误或遗漏,敬请指正

2024年7月5日,Bio-protocol 期刊在线发表了德国阿尔布施塔特-锡格马林根应用技术大学(Albstadt-Sigmaringen University of Applied Sciences)Barbara Hochecker团队题为“Quantification of Autophagosomes in Human Fibroblasts Using Cyto-ID® Staining and Cytation Imaging”的方法文章。

https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5025
关键词自噬 热疗 原代人皮肤成纤维细胞 绝对定量 基于成像的方法

自噬(Autophagy)是一个吞噬自身细胞质蛋白或细胞器并使其包被进入囊泡,并与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解其所包裹的内容物的过程,借此实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新

自噬是细胞的一种重要内部清理机制,通过隔离和降解损坏的细胞器和错误折叠的蛋白质来维持细胞稳态。这一过程涉及将目标物质封装在名为自噬体的双膜囊泡中,之后自噬体与含有酸性水解酶的溶酶体融合,完成降解过程。自噬的失调与多种疾病密切相关,包括神经退行性疾病、传染病、自身免疫性疾病、心血管疾病等。随着对自噬机制理解的深入,发现在特定的压力条件下,如饥饿、缺氧和DNA损伤等情况下,自噬活动会增强。因此,探索可以调节自噬活动的治疗方法和物质,对于开发新的疾病治疗策略具有重要意义。本文将探讨高温疗法如何通过调控自噬活动对细胞功能产生影响,以及如何准确量化自噬体的方法,以期为疾病治疗提供新的视角和工具。


  • 该方法使用特异性染料标记自噬体,并通过Cytation成像仪进行图像分析,整个过程操作简单,不费时,适合快速实验周期。

  • 通过优化的染料和成像技术,能够最小化对溶酶体的染色,同时在自噬体形成前期、自噬体以及自噬溶酶体中产生明亮的荧光,提高检测的特异性和灵敏度。

  • 使用Hoechst染料进行核染色,结合荧光显微成像技术,可以在活细胞中实时监测自噬体的数量和状态,允许研究者观察和分析自噬过程中的动态变化。

  • 疾病模型研究
    由于自噬与多种疾病(如神经退行性疾病、心血管疾病等)密切相关,该方法可以用于研究自噬在各种疾病模型中的作用,以及如何通过调节自噬来影响疾病进程。
  • 药物开发和筛选
    ‍该方法可用于筛选和评估能够调控自噬活动的新药物,尤其是那些目标为改善或修复自噬功能的候选药物。
  • 细胞应激响应研究
    通过对比正常条件与应激条件(如高温、缺氧等)下自噬体的数量和活性,可以深入理解细胞如何响应不同的环境压力。


这个方法的可重复性已经被本文作德国阿尔布施塔特-锡格马林根应用技术大学(Albstadt-Sigmaringen University of Applied Sciences)Barbara Hochecker团队验证过,相关实验数据与结果发表在J Therm Biol,DOI:10.1016/j.jtherbio.2024.103813

温馨提示:积极引用本文不仅是对作者创新技术和科研共享的最佳肯定,也是确保实验可复现性的重要方式。

Hochecker, B., Matt, K. C., Meßmer, A. L., Scherer, M. M. and Bergemann, J. (2024). Quantification of Autophagosomes in Human Fibroblasts Using Cyto-ID® Staining and Cytation Imaging. Bio-protocol 14(13): e5025. DOI: 10.21769/BioProtoc.5025.

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