在流式细胞术实验中，制备组织单细胞悬液是至关重要的步骤。此过程涉及将组织进行切割、酶促消化以及机械分离，旨在分解基质成分并裂解细胞间连接的同时，确保保留细胞的活性以及相关抗原。通过这种方法，可以成功分离出单细胞，以便获得高质量的流式细胞术数据。
二、组织单细胞悬液制备关键步骤和酶的种类
分散酶（Dispase）：一种具有高特异性的中性蛋白酶，主要针对IV型胶原和纤维连接蛋白进行作用，帮助分离细胞和解离组织块。然而，需注意的是，它可能会裂解某些表面分子或抗原。 胶原酶（Collagenase）：能够断裂胶原中的肽键，有助于消化细胞外基质并释放细胞。 透明质酸酶（Hyaluronidase）：降解细胞外基质中的透明质酸。 木瓜蛋白酶（Papain）：可以降解紧密结合的蛋白质，但可能导致细胞裂解和DNA释放，进而引发细胞粘连。 脱氧核糖核酸酶（DNase-I）：用于降解游离的DNA，以防止细胞粘连，而不影响细胞的凋亡路径。
在制备组织单细胞悬液的过程中，酶消化是一个关键步骤，需要注意以下几点：
酶的最佳浓度和强度：酶的浓度一定要适宜，过高的浓度可能会影响细胞表面标志物的完整性，从而影响这些标志物在后续实验中的可用性与细胞活性。因此，在处理粘附能力不强的细胞（如淋巴细胞）时，建议使用较短的消化时间和温和的酶，以避免这些问题。 消化时间：消化时间是决定成功的关键因素，应根据所用的具体酶和组织类型来调整。若消化不足，则可能导致细胞粘连和细胞碎片的增加；而若消化过度，则会显著降低细胞活性，并增加细胞碎片和粘连物的数量。 消化温度：为了确保酶反应的最大速度和效率，消化通常在37°C下进行。较低的温度（如4°C或在冰上）虽然可能减缓酶的反应速度并延长孵化时间，但在降低细胞死亡方面具有优势。 对表面抗原的影响：当研究细胞表面蛋白时，需避免使用胰蛋白酶，因为它可能会裂解细胞表面受体或膜蛋白，从而导致免疫表型实验中出现假阴性结果。
在制备组织单细胞悬液的过程中，以下关键步骤和注意事项不可忽视：
四、其它注意事项
在制备单细胞悬液的过程中，还需要特别注意以下几点细节：
避免使用组织匀浆器：此类强力机械分离方法可能会破坏细胞的完整性，因此不适用于单细胞悬液的制备。 温和处理细胞：应避免对细胞进行剧烈的漩涡处理，以保持细胞的活性和完整性，从而获得更可靠的实验结果。 正确的离心力：根据细胞的类型和状态，选择适宜的相对离心力（RCF），以避免使用过高或过低的离心力，从而防止细胞损伤或丢失。
免责声明：本号对所有原创、转载文章陈述与观点均保持中立，内容仅供读者学习和交流。文章、图片等版权归原作者享有，如有侵权，请留言联系更正或删除。
