在自然界中，真菌以其独特的生物特性和广泛的应用价值，成为了生物多样性中不可或缺的一部分。从美味的食用菌到致命的毒菌，从医药领域的青霉素到食品工业中的发酵剂，真菌在人类生活中扮演着多重角色。然而，随着环境的变迁和人类活动的增加，许多真菌种类面临着生存的威胁。为了保护这些珍贵的生物资源，真菌的保藏工作显得尤为重要。本文将探讨真菌保藏的重要性、方法以及在现代生物技术中的应用，旨在提高公众对真菌保藏的认识，并促进这一领域的科学研究和实践。

真菌保藏不仅是生物多样性保护的一部分，也是科学研究和产业发展的基础。通过有效的保藏方法，我们可以确保真菌资源的可持续利用，为未来的研究和应用提供保障。在这篇文章中，我们将深入了解真菌保藏的科学原理，探讨不同的保藏技术，以及它们如何帮助我们更好地理解和利用这些微小而强大的生命体。让我们一起揭开真菌保藏的神秘面纱，探索这一领域的最新进展和挑战。

真菌保藏是一项重要的生物技术，它涉及到将真菌菌种在一定条件下保存，以保持其活性和遗传稳定性。以下是几种常见的真菌保藏方法及其特点：

• 液体石蜡保藏法：这是一种变相的传代培养方法，通过在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，保持水分并阻止氧气进入，以减弱代谢作用。这种方法简便易行，但长期保存存活率低，占用空间大，易污染，且液体石蜡易燃。
• 真空冷冻干燥保藏法：这种方法的原理是菌体冷冻后在减压下利用升华现象除去水分，使细胞的生理活动停止；去除氧气后密封，达到长期维持生命状态的目的。适用于大多数产孢子真菌，但设备和操作都比较复杂。
• 液氮超低温冻结保藏法：将菌种悬液在控制速度冻结后，贮藏在液氮超低温储藏罐中。该方法操作简单，但需要具备液氮存储设备，并持续供应液氮。适用于大多数真菌种类，可以保证性状不变异。
• 定期移植法：这是一种简单经济的方法，通过每隔一段时间将菌种重新移植、培养一次，以保持菌种的活性。但这种方法易变异、易退化，操作繁琐、费时。
• 冷冻干燥法：通过冷冻干燥技术，将菌种在低温下干燥，然后密封保存，可以长期保藏，不易污染，存活率高，便于运输。但操作复杂，不适用于部分种类微生物。
• 土壤中保存：将菌种与土壤混合后进行干燥保存，适用于需要特定环境的菌种。
• 干燥保存：通过干燥剂如硅胶等，将菌种吸附后进行干燥保存。
• 灭菌蒸馏水中保存：将菌种悬浮于灭菌的蒸馏水中，然后密封保存。

每种保藏方法都有其适用的场景和优缺点，选择合适的保藏方法需要根据菌种的特性和保藏目的来决定。例如，对于需要长期保存且不易变异的菌种，液氮超低温冻结保藏法可能是最佳选择。而对于需要频繁使用且易于操作的菌种，定期移植法则更为合适。在实际操作中，还需要考虑保藏设备的成本和操作的复杂性。

液体石蜡保藏法是一种变相的传代培养方法，能够延长真菌的保藏时间。通过在斜面培养物或穿刺培养物上覆盖灭菌的液体石蜡，这种方法不仅可以保持适当的水分，还可以阻止氧气的进入，从而减弱真菌的代谢作用。

操作步骤如下：首先将液体石蜡经过灭菌处理后，在40℃温箱中蒸发水汽备用；然后将需要保藏的真菌菌种在适宜的培养基上培养，培育出健壮的菌体；接着用灭菌吸管将灭菌的液体石蜡注入已长好菌的培养基上，使菌种与空气隔绝，并确保液面高出培养基顶端1cm；最后将试管直立，放置在低温或室温下保存（4－15℃）。

液体石蜡保藏法的优缺点有：长期保存存活率较低；占用空间较大；容易受到污染；液体石蜡易燃。尽管存在这些缺点，但液体石蜡保藏法仍然是一种有效的方法，能够帮助延长真菌的保藏时间并降低代谢作用的发生。

操作步骤：

• 液体石蜡的准备：选用优质化学纯液体石蜡，分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎。液体石蜡可以通过121℃湿热灭菌30分钟，然后放在40℃恒温箱中蒸发水分，或者在160℃干热灭菌2个小时，冷却后经无菌检查备用。 
• 斜面培养物的制备：将需要保藏的菌种在最适宜的斜面培养基中培养，使得得到健壮的菌体或孢子。 
• 灌注石蜡：在无菌条件下，用灭菌的吸管吸取已灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，用量以高出斜面顶端1cm为准，使菌种与空气隔绝。 
• 保藏：将试管直立，置低温（4～6℃）干燥处保存，保藏时间可达2～10年。保藏期间应定期检查，如培养基露出液面，应及时补充无菌的液体石蜡。 

• 恢复培养：恢复培养时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，再重新转接一次。

优点：

• 制作简单，不需要特殊设备。
• 菌种可以保存1年左右不需要经常移种。

• 存活率高，故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法 。

缺点：

• 菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期相对较短。
• 传代次数多，菌种较容易发生变异和被污染。
• 保存的时候需要直立放置，占用空间较大。
• 对厌氧性细菌的保藏效果较差，尤其不适用于某些能分解烃类的菌种 。

液体石蜡保藏法适合实验室短期菌株的保存，而且保存时需要一定的空间。对于需要长期保存的菌种，可能需要考虑其他更为长期的方法，如液氮超低温冻结保藏法或冷冻干燥保藏法。

真空冷冻干燥保藏法

真空冷冻干燥保藏法是一种常用于真菌保藏的高效方法，通过将菌体冷冻后在减压下利用升华现象除去水分，从而停止细胞的生理活动，并去除氧气后密封，以达到长期维持生命状态的目的。这一方法被认为是真菌保藏方法中最有效的之一，适用于大多数产孢子真菌。

操作步骤包括以下几个关键步骤：首先，准备安瓿管，经过严格的灭菌处理；然后准备10％脱脂牛奶溶液并培养过夜，作为菌体保护剂；接着准备菌种，确保其纯度和健壮度；制备菌悬液并分装入安瓿管；随后进行冻结和干燥过程；最后进行封口处理，并保存于冰箱或室温暗处。

真空冷冻干燥保藏法的优缺点有：可以实现长期保藏，不易受到污染，存活率高，便于运输；但不适用于部分种类微生物，且操作相对复杂。尽管如此，真空冷冻干燥保藏法仍然是一种高效可靠的方法，可以帮助保持真菌的生物活性，适用于许多研究和实验需求。

液氮超低温冻结保藏法

液氮超低温冻结保藏法是一种常用于真菌保藏的有效方法，通过将菌种悬液在控制速度冻结后贮藏在液氮超低温储藏罐中，可以保证真菌的性状不变异。这一方法操作简单，但要求具备液氮存储设备，并需持续供应液氮，适用于大多数真菌种类（包括产孢和不产孢真菌）。

操作步骤包括以下几个关键步骤：首先，准备保护剂，如10％甘油溶液或10％二甲亚砜溶液；然后将菌种与保护剂混合后，转移至-80℃冰箱或液氮中储存；最后，在需要恢复培养时，将冻存管迅速解冻并将菌体移入适宜的培养基上培养。

液氮超低温冻结保藏法的优缺点包括：适用范围广泛，方法简便，且菌种不易退化；但设备和管理费用较高，取用不太便利。尽管如此，液氮超低温冻结保藏法仍然是一种高效可靠的保藏方法，能够帮助长期保存真菌并保持其生物特性的稳定性。

斜面低温保藏法

斜面低温保藏法是一种简单经济的真菌保藏方法，操作步骤包括将菌种接种在固体斜面培养基上，待菌充分生长后，将其移至2—8℃的冰箱中进行保存。这种方法不需特殊设备，随时取用，具有一定的便利性。

然而，斜面低温保藏法也存在一些缺点，例如容易导致变异和退化，维护过程较为繁琐费时。尽管操作简单，但保藏期间需要定期监测和维护，以确保真菌的存活和生物特性的稳定性。

总的来说，斜面低温保藏法是一种适用于简单场景下的真菌保藏方法，虽然存在一些缺点，但对于一些常用菌种的保藏来说，仍然是一个有效的选择。必须注意维护细节，以确保真菌在低温条件下得以有效存储。

操作步骤：

• 制备斜面：首先，将待保藏的菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，如肉膏蛋白胨斜面培养基。培养基需要在恒温培养箱中培养两天，以检验是否有污染。
• 接种：确保菌种无污染后，进行转接。可以使用平板转接斜面或斜面转接斜面的方法。
• 密封试管：待菌充分生长后，用灭菌的吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，用量以高出斜面顶端1cm为准，使菌种与空气隔绝。

• 低温保存：将密封好的试管直立，置于2—8℃的冰箱中保藏。保藏时间依微生物的种类而有不同，一般细菌每月移种一次，酵母菌两个月，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月。

优点：

• 操作简便，不需要特殊设备。
• 成本低廉，易于观察菌种状态。

• 复苏方便，可以随时对微生物的状态进行观察。

• 保藏时间较短，需要经常传代处理。
• 因连续传代而容易引入基因突变或者杂菌。

• 培养基的理化性质及微生物代谢产物可能导致微生物性状发生改变。

其他方法

除了斜面低温保藏法之外，还有多种其他真菌保藏方法可供选择，如蒸馏水保藏法、沙子保藏法、硅胶保藏法等。这些方法各具特点，适用于不同的真菌种类和实验室条件。选择合适的保藏方法需要考虑真菌的种类、实验室条件以及预期的保藏时间。

蒸馏水保藏法适用于一些特定的真菌菌株，通过将真菌菌丝悬浊在蒸馏水中进行保存。沙子保藏法是将真菌接种在含有一定湿度的沙子中进行存储，可以保持真菌的适宜水分条件。硅胶保藏法则利用硅胶吸附水分的特性，将真菌保存在硅胶干燥剂中，有效防止真菌受潮变质。

随着国自然竞争的日益激烈，如何让自己的申报项目脱颖而出，成为了科研工作者的一大难题。今天，我们带来了《2025国自然申报技巧解密系列课程》，助你在申报路上一臂之力。

本系列课程结合最新的国自然政策动向和丰富的实战经验，为你提供全方位的申报指导。从国自然项目的发展历程到申报与评审流程，从立项依据的撰写到研究团队的配置，每一环节都配有精辟的讲解和实用的技巧。