在微生物学研究和工业应用中，菌种的保存是一个至关重要的环节。有效的菌种保存方法不仅能确保菌种的活力和纯度，还能为后续实验提供可靠的材料。甘油保存法因其操作简便、保存时间长、适用范围广等优点，成为实验室中常用的菌种保存方法之一。
甘油是一种多元醇，具有良好的抗冻性能，能够有效防止细胞在冷冻过程中因冰晶形成而受损。使用甘油保存菌种的基本步骤如下：首先，将菌种培养至对数生长期，以确保菌体处于最佳状态。然后，将培养好的菌液与适量的甘油混合，通常甘油的终浓度为10%至30%。混合均匀后，将菌液分装至灭菌的冻存管中，并迅速冷冻至-80℃保存。需要注意的是，甘油的浓度和混合比例应根据不同菌种的特性进行调整，以达到最佳保存效果。
在实际操作中，常用的甘油保存方法包括直接将菌液与甘油混合后冷冻保存，以及将菌种接种于含有甘油的培养基中进行保存。前者适用于大多数细菌和酵母菌，而后者则适用于一些对保存条件要求较高的菌种，如链球菌和奈瑟氏菌等。此外，为了确保保存效果，保存前应对菌种进行纯化，并在无菌条件下操作。
在保存菌种时，通常需要使用一定浓度的甘油来保持细菌的活性。一般来说，甘油的浓度控制在20%至30%之间效果较好。由于菌的液体培养基中含有水分，因此常用50%浓度的甘油来保存菌液。
具体使用甘油保存菌种的基本步骤如下：
准备50%浓度的甘油溶液，可将适量甘油加入适量蒸馏水中充分混合而成。 从培养基中挑取所需的菌种，并将菌落转移到含有50%甘油的离心管中。 将含菌的甘油溶液均匀混合后，尽量减少气泡的产生。 使用冻存管将混合液分装，标记好菌种信息和保存日期。 将冻存管置于-80摄氏度的冰箱中长期保存。
通过以上步骤，可以有效地利用甘油保存菌种，确保其长期保存和保持活性。
使用甘油保存菌种是一种常见且有效的方法，能够确保菌种在低温条件下长期保持活力。以下是详细的步骤：
甘油溶液：配制50%的甘油溶液（等体积的蒸馏水和甘油混合）。 培养基：适合菌种生长的液体培养基，如LB培养基。 冻存管：2 mL无菌冻存管。 无菌操作工具：如无菌枪头、接种环等。
操作步骤
培养菌种：
将菌种接种到液体培养基中，培养至对数生长期（通常过夜培养即可）。 确保培养基内的菌液浓度较高，以便获得足够的菌体。
配制甘油混合液：
在无菌操作条件下，将培养好的菌液与50%的甘油溶液按1:1的比例混合。即每1 mL菌液加入1 mL 50%甘油溶液，使甘油的终浓度达到25%。
分装冻存：
将混合好的菌液分装到无菌冻存管中，每管约1 mL。 轻轻混匀，确保甘油和菌液充分混合。
冷冻保存：
将分装好的冻存管迅速放入-80℃冰箱中保存。 为了减少冰晶对菌体的损伤，可以先使用液氮速冻，然后再转移到-80℃冰箱中。
注意事项
无菌操作：整个操作过程应在无菌条件下进行，以防止污染。 甘油浓度：根据不同菌种的特性，甘油的终浓度可以在10%至30%之间调整。 保存时间：在-80℃条件下，菌种可以保存数年之久，但每次冻融操作会减少其保存年限。
复苏步骤
取出冻存菌：
从-80℃冰箱中取出冻存管，迅速在无菌条件下操作。
使用无菌接种环或灭菌枪头，从冻存管中取出适量菌液，划线接种到含有适当培养基的平板上。 在适宜的温度下培养过夜，挑取单个克隆进行后续实验。
保存细菌菌种时，常采用添加甘油的方法来维持其活性和稳定性。以下是使用甘油保存菌种的基本步骤：
首先，配制纯度高的50%甘油溶液，按照水和甘油1：1的比例混合，并经过高温高压灭菌后才能使用。 在超净工作台上操作，取相应量的菌液和50%甘油，比例为1:1混合。一般情况下，可分别取0.5mL的菌液和0.5mL的甘油，轻轻混匀后倒入菌液管中。务必在管子上标注菌种类型、冻存人信息、冻存时间及冻存代数等重要信息。 将装有混合液的菌液管放置于-20℃或-80℃的冰箱中进行短期保存。若需要长期保存，应将样品转移到液氮中保存，以确保菌种的稳定性和保存质量。
对于科研工作者来说，及时掌握行业领域的研究热点是十分重要的，所以申请国自然就必须参考以往中标的申请书。那么我们该如何查询到近年来别人的国基立项项目呢？
必用神器：ZCOOL国自然基金查询系统
功能1：75万国自然立项数据
共计收录75万基金项目数据，2023年全学科领域立项数据已更新！
![]()
注：平台所有数据均来源于互联网络
注：平台所有数据均来源于互联网络
功能2：AI可视化项目研究
独家更新【AI项目摘要】、【AI项目思路】以及【AI技术路线】3大王炸功能。提供成功项目范例，有助于申请人理解国自然的审评标准和期望更好地构建国自然标书！
![]()
功能3：2023最新中标项目，9大维度分析
系统归纳整理了【领域研究热点分析】、【学科研究热度分析】、【研究单位中标情况分析】、【项目负责人中标项目汇总】4大功能，多角度进行中标基金项目数据分析，助您在基金项目申请上“一投必中”
神器免费，永久使用名额限时领！
点击原文链接即可查询↓ ↓ ↓
