培养瓶和培养皿:培养瓶通常以其底面积命名,如T25表示25平方厘米的底面积,而培养皿则以直径大小命名,如10cm。这些耗材几乎全部由组织培养处理型聚苯乙烯制成。
根据需要的细胞量,可以选择不同大小的培养瓶。例如,600ml和300ml的瓶子适用于大规模培养,如单克隆细胞培养;50ml和25ml的瓶子适用于一般性细胞实验和复苏细胞。
多孔板:
多孔板适用于微量的多次重复实验,如带有961536个孔的微量板,或带有424个孔的多孔板。它们通常由透明的聚苯乙烯制成,有平底和锥形底或圆底之分。
为避免边缘效应,通常在96孔板的边缘加一圈PBS。
冻存类产品
冻存管:用于细胞的冷冻保存,需要耐受80摄氏度甚至液氮环境196℃的低温,保持不变形和密闭,防止污染。
螺口管:与冻存管相似,但只能耐受到80℃的低温环境,常用于小剂量试剂的保存或短期细胞冻存。
血清移液管和离心管
血清移液管:用于大容量的培养基转移,减少操作次数,降低污染风险。
离心管:常用于血清、培养基、缓冲液的分装,培养液的中转,以及细胞收集后的离心。
细胞培养用具的使用经验
贴壁细胞传代:
将细胞悬液转移到15ml离心管中,8001000rpm离心35分钟后移除上清。加入新的含血清完全培养液,重新悬挂成单细胞悬液,并按照推荐的传代比例分配到培养器皿中。
悬浮细胞传代:
悬浮细胞可以直接传代或离心收集细胞后传代,不需要使用酶消化法。直接传代时,静置后吸收部分原始培养液,补充新鲜含血清的完整培养液,混合成细胞悬浮液。
壁挂式悬浮混合细胞传代:
收集悬浮细胞后,参考贴壁细胞传代方法进行消化收集,一起接种培养器皿。
培养瓶
在细胞培养实验中,选择合适的培养瓶至关重要。如今,常见的培养瓶大多采用一次性已灭菌的塑料培养瓶,主要材料为聚丙乙烯。当选购或使用培养瓶时,需注意其中一个关键细节:是否经过表面处理。
由于聚丙乙烯具有疏水性,如果要细胞在瓶内表面生长良好,就需要对表面进行处理,赋予其电荷。只有这样,细胞才能较容易地附着在表面生长。对于贴壁生长的细胞而言,选择经过表面处理的培养瓶至关重要;而对于悬浮生长的细胞,则不受表面处理的影响。
在选择培养耗材时,需根据所要培养的细胞类型和生长习性,以及实验需求进行合理选择。培养瓶大小和多孔板的孔数也是重要考虑因素,不同规格的培养器皿适用于不同的实验操作和细胞培养需求。因此,在实验中,根据细胞的特性和培养方式,选择合适规格和处理过的培养器皿,将有助于获得更好的实验结果和细胞培养效果。
培养板
在进行细胞培养实验时,选择合适的培养器皿至关重要,具体取决于培养细胞的目的和需求。如果您需要培养细胞数量不多,但需要进行多次重复检测,建议选择多孔板进行培养。而如果您需要大量细胞,无论是为了练手、冻存资源还是进行大规模实验,建议选择培养瓶和培养皿,尤其是新手,优先考虑使用培养瓶,因为其敞口较小,减少了污染的风险。
若您希望单次培养细胞量能达到较高数量级,比如达到108数量级,推荐使用多层培养瓶,也称为细胞工厂。而对于悬浮生长的细胞,且单次培养需要较高数量级的情况下,则建议使用搅拌瓶配合适当的搅拌方式进行培养。根据一张以HeLa细胞为例的图表显示,不同类型和规格的培养器皿在细胞产量方面存在差异。一般来说,表面积越大的器皿可以容纳更多的细胞,但这并非完全线性关系,还受到培养基总量、氧气和二氧化碳交换效率等因素的影响。
需要注意的是,多孔板的规格按照孔的数量来划分,孔数越少则每个孔的培养面积越大;而培养皿则是按直径来划分,直径越大则培养面积越大。培养瓶通常以培养面积代号来命名,例如T25,代表培养面积为25cm2。
其他耗材
在进行细胞培养实验时,除了常见的培养瓶和培养皿外,还有一些其他特殊类型的耗材也具有重要作用。细胞工厂是一种立体培养系统,其规格不仅包括每层的培养面积,还包括层数,层数越多细胞产量也会相应增加。通过立体培养,细胞能够更有效地生长和繁殖,有利于获得更多的细胞数量。
另外,搅拌瓶是一种具有特殊设计的培养器皿,其标准主要分为喷洒和非喷洒两种类型。喷洒类型指在培养过程中向内部喷洒5%的二氧化碳气体,这有助于促进细胞生长,特别是当大量细胞在有限空间内生长时。搅拌瓶通过不断搅拌和喷洒二氧化碳,提供了更优越的细胞生长环境,从而提高细胞产量并促进细胞的健康生长。
细胞培养实验中的其他耗材选择,同样需要根据实验需要和细胞特性综合考量。不同类型的耗材具有各自的优势和适用场景,正确选择和使用这些耗材将有助于实验顺利进行,并获得精确可靠的实验结果。
经验总结
在进行细胞培养实验时,除了选择合适的培养器皿外,还需注意一些细节问题,这些细节对细胞生长和实验效果也有一定影响。对于使用密闭不透气的培养瓶时,放入培养箱前应将瓶盖松开一圈,以确保内部过量产生的二氧化碳能够及时排出,同时也有利于培养箱内的二氧化碳进入瓶内,提供适宜的气氛环境。若瓶盖设计为透气式,则直接拧紧即可,无需担心气体交换问题。
在使用多孔板和培养皿时,最好使用封口膜将盖子与器皿或板的边缘封闭起来,这是因为多孔板和培养皿的盖子无法完全紧闭,容易导致在培养过程中靠近边缘的部位或孔处蒸发较严重,导致细胞生长不均匀现象。通常表现为边缘位置细胞生长较慢,时间长了会造成中心位置细胞密度高而边缘位置细胞密度低的情况。因此,在细胞培养实验中,除了正确选择适合的耗材外,注意这些细节问题同样重要。
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