单双端测序有何不同?

文摘   2024-11-05 21:00   广东  

单端测序(Single-End Sequencing,SE)和双端测序(Paired-End Sequencing,PE)是基因组测序中的两种常见测序方式,它们的主要区别在于读取DNA片段的方式,这对下游数据分析会产生不同的影响。本文将对对这两种测序方式进行介绍。

一、单端测序

  • 测序原理

将DNA样品进行片段化处理,形成200~00bp的片段。

引物序列连接到DNA片段的一端,然后末端加上接头。

将片段固定在flowcell上生成DNA簇,上机测序单端读取序列。

  • 特点

建库简单,操作步骤少。

成本较低,因为每个片段只读取一次,耗时和资源较少。*数据处理较快,文件较小,分析速度快,存储需求低。

但信息有限,缺乏片段另一端的信息,难以准确定位重复序列或复杂结构。

错误纠正能力弱,无法通过双端比对来确认序列的正确性。

二、双端测序

  • 测序原理

构建Paired-nd文库制备,即在构建待测DNA文库时在两端的接头上都加上测序引物结合位点。

在第一轮测序完成后,去除第一轮测序的模板链。

用对读测序模块(Paired-End Module)引导互补链在原位置再生和扩增,以达到第二轮测序所用的模板量。

进行第二轮互补链的合成测序。

  • 特点

比对精度高,双端数据能让分析软件更准确地匹配到基因组中的位置,即使是重复区域也能得到更准确的定位。

检测结构变异的能力更强,如基因组中的插入、缺失、倒位等。

提高错误纠正能力,如果一端发生了测序错误,另一端的数据可以帮助确认正确的序列。

但成本较高,因为双端测序会消耗更多的试剂和时间。

数据分析更复杂,需要额外的时间和计算资源来处理双端数据。


三、单端测序与双端测序的比较

读取方式:单端测序只读取DNA片段的一端序列,而双端测序则读取DNA片段的两端序列。

信息获取:单端测序获取的信息有限,无法得知片段另一端的序列信息;双端测序则能提供更全面的信息,有助于更准确地定位和分析。

应用场景:单端测序适用于简单的DNA测序或RNA-Seq(在单端足够解析转录本丰度的场合);双端测序则更适用于基因组重测序、复杂的RNA-Seq、转录组或宏基因组测序等需要高精度数据的场景。




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