实验室消除PCR污染是一个复杂而细致的过程,需要严格遵守操作规范,采取一系列有效的措施来防止和消除污染。以下是对实验室如何消除PCR污染的一些步骤和建议。
1. 及时发现并隔离污染源
立即停止实验:一旦发现PCR污染迹象,应立即停止所有相关实验,避免污染扩散。
覆盖污染源:用吸水纸或布覆盖溢出的样本或污染物,防止其进一步扩散。
排查污染来源:仔细排查实验过程中可能存在的污染环节,如样本处理、试剂配制、扩增产物处理等。
2. 物理隔离与清洁
分区操作:严格按照实验室分区进行操作,避免不同区域间的交叉污染。试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区应明确划分,不可逆行。
全面清洁:对实验室进行全面清洁,包括台面、地面、墙面、仪器表面等。使用合适的消毒剂(如次氯酸、过氧乙酸等)进行喷洒或擦拭,确保无死角。
3. 消毒与灭菌
消毒剂选择:根据污染物的性质选择合适的消毒剂。常用消毒剂有次氯酸、过氧乙酸、酒精等。
消毒方法:
对于溢出的样本或污染物,应立即用布或纸巾覆盖污染区,由外围向中心倾倒消毒剂(如次氯酸消毒剂),等待一定时间(如30分钟)后清除污染物品,再用消毒剂擦拭,并用75%酒精喷洒消毒。
对于实验台面、仪器表面等,可使用0.2%含有效氯消毒液或75%酒精喷洒消毒其外表面。试管架、实验台面、移液器等使用75%酒精进行擦拭。随后关闭生物安全柜,紫外灯照射30分钟。
对于空气消毒,可以使用75%酒精空中喷雾,并开启紫外消毒装置延长照射时间(如4小时以上)。若污染比较严重(如大量溢撒时)可用过氧化氢加热熏蒸实验室,剂量为2g/m3,熏蒸过夜;或20g/L过氧乙酸消毒液用气溶胶喷雾器喷雾,用量8ml/m3,作用1-2小时。
灭菌处理:对于耐高温的物品,可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌处理。
4. 通风换气
增加通风量:开启实验室通风设备,增加通风量,降低室内污染物浓度。
避免内循环:尽可能采用外循环通风方式,避免污染物在实验室内部循环。
5. 更换试剂与耗材
更换试剂:怀疑试剂污染时,应立即更换新批号的试剂。
更换耗材:一次性使用的耗材(如吸头、反应管等)应确保无污染;可重复使用的耗材(如离心管架、扩增管架等)应经过彻底清洁和消毒后再使用。
6. 使用专业设备辅助
核酸气溶胶污染清除剂:使用核酸气溶胶污染清除剂对实验室空气、台面、仪器表面等进行清洁,以有效降解空气中的气溶胶与附着在表面的核酸污染。
实验室污染去除仪:对于难以清除的污染,可考虑使用专业的实验室污染去除仪进行处理。
7. 持续监测与验证
设立阴性对照:每次实验都应设立阴性对照,以监测是否存在污染。阴性对照应不包含模板DNA但包含PCR系统中的所有其他成分。
连续检测:在消除污染措施实施后,应连续进行多次(如三次)阴性对照检测,确保无污染后方可恢复常规实验。
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