海藻糖在分子生物学中的用途

文摘   2024-09-24 21:04   广东  

海藻糖,又称为α,α-海藻糖或α-D-吡喃葡萄糖基-α-D-吡喃葡萄糖苷,是由两个葡萄糖分子通过糖苷键连接而成的非还原性双糖。这种双糖分子因其独特的物理化学性质和生物活性,在分子生物学领域引起了广泛关注。本文将深入探讨海藻糖在生物制品稳定、基因工程、细胞保护以及实验技术优化等方面的应用。


一、生物制品的稳定剂

1. 疫苗和药物的保存与运输

海藻糖因其优异的稳定性,常被用作生物制品的稳定剂。在疫苗和药物的保存与运输过程中,海藻糖能够有效保护蛋白质、酶及细胞等生物活性成分,防止其在极端条件下(如高温、冷冻、干燥等)失活。这一特性使得海藻糖在疫苗和药物的长期保存和长距离运输中发挥了重要作用。例如,英国剑桥的Quadrant研究基金会将小儿麻痹症疫苗与海藻糖混合冻干后,发现疫苗在干燥状态下45℃时其稳定性和液态4℃保存条件时相当。这一研究成果不仅简化了疫苗处理工序,降低了疫苗的贮存及运输成本,还保证了长距离运输疫苗仍可保持相当高的活性,对全球疫苗接种计划具有重要意义。

2. 细胞和组织的保存

海藻糖还被用于细胞和组织的保存。通过将海藻糖与细胞或组织混合后进行干燥处理,可以制备出长期保存且具有高度活性的细胞和组织样品。例如,美国加利福尼亚大学的约翰•克劳及其同事将海藻糖与制造血小板的细胞混合,经干燥脱水使细胞变干后,将其冻干在室温下可长时间保存。实践证明,加入海藻糖并经长时间保存的血小板在水化后仍有85%存活,存活率比大多数血库短期保存的血小板还高。这一技术为临床输血、组织工程和再生医学等领域提供了可靠的解决方案。


二、基因工程中的保护剂

1. 酶的稳定剂

在基因工程研究中,各种工具酶(如DNA限制性内切酶、DNA连接酶和DNA聚合酶等)的稳定性和活性对实验的成功与否至关重要。海藻糖作为酶的稳定剂,能够在高温、高寒、干燥等恶劣条件下保护酶的结构和活性,从而维持酶的催化功能。例如,英国大学Camilo.C等详细研究了海藻糖对DNA限制性内切酶、DNA连接酶和DNA聚合酶的保护作用,结果表明加入海藻糖干燥的酶样在高温和长时间保存后,其活力并无损失。这一特性使得海藻糖在基因工程研究中具有广泛的应用前景。

2. DNA和RNA的保存

海藻糖还可作为DNA和RNA的保存剂。在分子生物学实验中,经常需要保存和运输高浓度的DNA或RNA样品。海藻糖能够在干燥状态下形成稳定的玻璃态结构,从而保护DNA和RNA免受降解和变性。这一特性使得海藻糖成为珍稀样本基因组或极低浓度基因组的理想保存剂。


三、细胞保护与再生医学

1. 细胞膜和蛋白质结构的稳定

海藻糖对细胞膜和蛋白质结构的稳定作用在再生医学领域具有重要意义。在细胞培养和移植过程中,细胞膜和蛋白质结构的稳定性直接关系到细胞的成活率和功能恢复。海藻糖能够在细胞表面形成特殊的保护膜,有效防止水分流失和外部环境对细胞的损伤,从而维持细胞的正常生理功能。

2. 细胞冻存与复苏

在细胞冻存与复苏过程中,海藻糖同样发挥着重要作用。通过将海藻糖与细胞悬液混合后进行冷冻处理,可以制备出长期保存且具有高度活性的细胞样品。在复苏过程中,海藻糖能够有效保护细胞膜和蛋白质结构不受损伤,从而提高细胞的复苏率和功能恢复率。这一特性使得海藻糖在干细胞治疗、组织工程和再生医学等领域具有广泛的应用前景。



四、PCR优化

1. PCR增效剂

在分子生物学实验中,PCR扩增效率及扩增特异性对实验结果的准确性至关重要。海藻糖作为PCR增效剂,能够在高温、高寒、干燥失水等恶劣条件下在细胞表面形成特殊的保护膜,有效保护DNA双链结构不被破坏,从而提高PCR扩增效率和扩增特异性。此外,海藻糖还能够中和抑制剂对DNA聚合酶的抑制作用,维持PCR扩增效率。这使得海藻糖在分子生物学研究中成为不可或缺的辅助试剂。

2. 实时荧光定量PCR添加剂

在实时荧光定量PCR实验中,海藻糖同样发挥着重要作用。作为SYBR Green I法实时荧光定量PCR添加剂,海藻糖能够有效降低SYBR Green I对PCR的抑制,提高实验结果的准确性和可重复性。这一特性使得海藻糖在基因表达分析、病原体检测等领域具有广泛的应用前景。




【参考文献】

[1] 曲茂华, 张凤英, 何名芳, 陈卫平. 海藻糖生物合成及应用研究进展[J]. 食品工业科技, 2014, (16): 358-362.

[2] 聂凌鸿,宁正祥.海藻糖的生物保护作用[J].生命的化学,2001,21(3):206-209.

[3] 海藻糖(Trehalose)特点及在分子实验中的应用-翌圣官网





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