1 VVFP对小鼠体质量的影响
2 VVFP对肝损伤小鼠血清TG、TC浓度及ALT、AST活性的影响
3 VVFP对肝损伤小鼠炎症因子TNF-α和IL-6的影响
通过测定血清中炎症因子的水平可确认VVFP是否具有保肝作用。如图2所示，与空白组相比，模型组的小鼠血清炎症因子TNF-α和IL-6水平均极显著升高（P＜0.01），说明酒精肝损伤会引发小鼠肝脏炎症反应。与模型组相比，阳性对照组以及不同剂量VVFP组小鼠血清炎症因子TNF-α和IL-6水平均极显著降低（P＜0.01），说明VVFP可以改善肝细胞的损伤程度。
4 VVFP对肝损伤小鼠肝脏ADH、MDA、T-SOD及GSH-PX水平的影响
5 VVFP对小鼠肝组织病理切片的影响
对小鼠肝组织病理切片和苏木精-伊红染色观察，结果如图4所示。空白组小鼠肝小叶及细胞核结构清晰，肝窦无明显充血，无显著病变状况（图4A）；模型组小鼠肝小叶及细胞核结构被破坏，排列紊乱，出现水肿现象（图4B），这与Parikh等描述的肝损伤时出现的症状相似，具有典型的病理特征，表明急性ALD建模成功。给药后，与模型组相比，多肽低剂量组（图4D）和高剂量组（图4F）在不同程度上有所改善，肝小叶及细胞核结构较清晰、肿胀范围减小，肝细胞排列紊乱现象减轻；阳性对照组（图4C）和多肽中剂量组（图4E）肝细胞形态趋于正常，排列整齐，呈放射状分布，细胞损伤状况明显改善。肝组织病理学分析结果进一步证实VVFP对ALD小鼠肝脏细胞损伤有明显的改善作用。
6 小鼠肠道菌群有效数据统计
7 小鼠肠道菌群α多样性分析
由图5可知，模型组的Chao1和Observed_species指数均高于其他组，说明小鼠在短时间内大量饮酒会造成肠道菌群紊乱。在中剂量VVFP的干预下，ALD小鼠盲肠菌群丰度降低，更接近于正常水平，改善了ALD小鼠的肠道紊乱；模型组的Shannon指数均低于其他组，说明模型组的物种均匀度较低，在中剂量VVFP的干预下，ALD小鼠盲肠菌群的均匀度提高。由上述结果可知，VVFP的干预能够改善因酒精影响而发生变化的肠道菌群多样性。
8 小鼠肠道菌群物种组成分析
如图6所示，按门水平分类，小鼠肠道菌群主要由拟杆菌门（Bacteroidota）、厚壁菌门（Firmicutes）和脱硫弧菌门（Desulfobacterota）组成。空白组的肠道菌群中拟杆菌门占50.83%，厚壁菌门占34.19%，脱硫弧菌门占7.34%；模型组肠道菌群中拟杆菌门占71.98%，厚壁菌门占21.24%，脱硫弧菌门占2.56%。与空白组相比，模型组的拟杆菌门菌群丰度上升，厚壁菌门和脱硫弧菌门的菌群丰度下降，说明小鼠经过酒精灌胃后，造成了肠道紊乱，与正常小鼠的差异较大。与模型组相比，阳性对照组与中剂量组的拟杆菌门菌群丰度下降，分别达到51.54%和57.26%；厚壁菌门的菌群丰度上升，分别为38.63%和31.73%，均接近正常的小鼠，说明中剂量的VVFP可以达到联苯双酯滴丸的干预效果，有效缓解ALD导致的肠道菌群紊乱。
小鼠肠道菌群在属水平上主要由链霉菌属（Streptomyces）、乳酸杆菌属（Lactobacillus）和弧菌属（Vibrio）组成（图7）。空白组、模型组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组链霉菌属占比分别为26.88%、40.81%、20.54%、23.90%、27.69%和23.46%；乳酸杆菌属占比分别为22.39%、12.60%、28.02%、14.33%、14.50%和15.55%；弧菌属占比分别为15.29%、13.14%、20.28%、21.93%、16.75%和12.89%；与空白组相比，模型组链霉菌属菌群丰度上升，乳酸杆菌属和弧菌属菌群丰度下降，说明模型组小鼠的肠道菌群失调。经过中剂量VVFP的干预后，与模型组相比，链霉菌属的菌群丰度下降，与空白组接近；乳酸杆菌属和弧菌属的菌群丰度在一定程度上有所上升，说明VVFP对患有急性ALD小鼠的肠道菌群有一定的调节功效。
9 小鼠肠道菌群LEfSe分析
讨 论
现代医学对ALD发病机制的研究已取得较大进步，脂质代谢异常、氧化应激、炎症反应等被公认为ALD的重要影响因素。ALD在代谢过程中引起的直接或间接的氧化应激、脂质过氧化作用以及多种因素（如肠道菌群失调）相互作用导致的肠道通透性增加，对肠道黏膜造成损伤，影响肠道菌群数量，引起细菌和细菌内毒素的位移（经过肠道组织到达肝脏），最终导致肝脏炎症。虽然通过服用药物可以起到治疗效果，但其毒副作用较大。大量的研究表明，食用菌肽具有丰富的药理价值，对肝损伤有很好的保护和缓解功效，但对于VVFP的研究仍存在较多的空白。本研究以56°红星二锅头灌胃小鼠建立急性ALD模型，探究VVFP对ALD的预防作用。结果显示，模型组、阳性对照组以及不同剂量VVFP组小鼠与空白组小鼠体质量均无显著性差异，说明VVFP无毒副作用。
肝脏是人体中唯一一个没有痛感神经的器官，极易受有毒化学物质损伤，造成肝脏代谢功能紊乱。在酒精代谢刺激下，肝脏出现氧化应激反应，肝细胞受损。ALT、AST水平是反映肝细胞损伤最直接和最敏感的指标，Dong Qingqing等发现在健康肝脏中ALT、AST很高，而血液中含量很低，一旦肝脏细胞受损，大量ALT和AST会释放到血清中使血清中含量升高，ALT与AST的水平在一定范围内反映机体肝细胞的损伤程度。Reddy等通过研究指出，当肝脏脂肪代谢出现能力出现障碍时，血清中TC和TG两种代谢物含量会升高。湛莉等认为，当肝脏受损时，会分泌大量的炎性细胞因子，尤其是TNF-α、IL-6，二者水平能反映肝细胞炎症程度。本研究结果显示，VVPF能极显著降低血清中TG、TC、ALT和AST水平（P＜0.01），并能降低TNF-α、IL-6炎症因子水平，说明VVFP可以减缓酒精引起的代谢紊乱。
在大量酒精的干预下，肝脏中脂肪酸的合成和代谢失去稳态平衡。ADH、MDA、T-SOD和GSH-PX水平能够较好地反映肝脏氧化程度。韩光顺等探究茴香提取液对小鼠酒精性肝损伤的保护作用时发现，ADH活力能灵敏地提示肝细胞的损伤及损伤的程度；MDA含量可反映出机体脂质氧化水平，间接表明肝细胞的损伤程度；Forrester等研究发现T-SOD能够清除过氧化产生的自由基从而调节代谢平衡；GSH-PX作为体内重要的抗氧化剂，可以清除活性氧。本研究结果显示，与模型组相比，VVFP能够极显著降低MDA含量（P＜0.01），明显提高肝脏中ADH、T-SOD和GSH-PX水平，证实VVFP可以减轻酒精引起的肝损伤，提高人体防御系统的抗氧化活性，从而防止慢性酒精中毒对肝脏的损害。肝组织病理切片也进一步证实了VVFP的保肝活性。
基于16S rDNA高通量测序分析VVFP对ALD小鼠肠道菌群的影响。在VVFP的干预下，门水平上拟杆菌门菌群丰度下降，厚壁菌门的菌群丰度上升，这与韩琳的研究结果一致。Li Koukou等通过高通量测序分析发现，灵芝多糖S3降低了拟杆菌门的相对丰度，提升了厚壁菌门的相对丰度，显著减轻了小鼠胰腺炎症状；在属水平，VVFP降低了链霉菌属的菌群丰度，增加了乳酸杆菌属和弧菌属的菌群丰度。乳酸杆菌是人体肠道内重要的益生菌，不仅可以分解代谢肠道内的益生元，还能维持免疫平衡，增强肠道屏障。范颖等研究了大蒜多糖对ALD小鼠肠道菌群失调的影响，结果表明大蒜多糖组的多样性指数和均匀度指数最高，优杆菌属和乳酸杆菌属细菌增多。上述结果表明，VVFP能够改善ALD小鼠肠道菌群。
综上所述，VVFP能极显著降低血清中TG、TC、ALT、AST和肝脏中MDA水平，并且降低TNF-α与IL-6炎症因子水平，同时明显提高肝脏中ADH、T-SOD和GSHPX水平。此外，VVFP可通过调节拟杆菌门、厚壁菌门、链霉菌属乳酸杆菌属和弧菌属的丰度减轻小鼠肝脏的损伤程度。本研究结果可为多肽在功能食品领域的应用提供药效基础。
本文《草菇子实体多肽对小鼠急性酒精肝的预防作用及肠道菌群的影响》来源于《食品科学》2023年45卷第4期135-143页，作者：张芳艺，林海潞，陈莉莉，罗小芳，褚路路，江玉姬，陈炳智*。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20221213-135。点击下方阅读原文即可查看文章相关信息。
实习编辑：天津商业大学食品科学与工程学院 梁雯菁；责任编辑：张睿梅。点击下方阅读原文即可查看全文。图片来源于文章原文及摄图网。
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