因上次分享核酸提取议题后,有朋友提及想进一步了解磁珠法核酸提取试剂开发原理与难点,故特意邀请了一位专业老师为我们进行分享和交流,现将分享内容做个简要总结。
磁珠法核酸提取试剂开发原理
磁珠法(磁性纳米颗粒吸附法)的核心是生物磁珠,生物磁珠是一种新型的功能化固体载体,其表面包被有活性基团,可以与多种生物活性物质发生偶联,兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点,在外磁场的作用下可以定向移动和集中,当撤去外磁场后,稍加振荡或抽吸又可均匀分散于液体中,从而使固液相的分离变的十分快捷方便,通过简单的洗脱可以得到纯度很高的靶向物质。
具体而言,磁珠(即磁性纳米颗粒)通常以表面富含带正电荷化学基团的FeSO2或Fe3SO4制备。
在经过裂解的混合液中加入磁珠,当液体环境为偏酸性(PH5.0)时,游离的DNA分子被吸附到磁珠上。
此时利用磁场将磁珠固定,将磁珠与液体分离而弃除杂质,同时反复洗涤多次,可除去磁珠表面附着的其他物质。
在洗涤后的磁珠中加入偏碱性(PH8.0)的TE缓冲液(Tris-EDTA buffer solution)或磷酸缓冲液(Phosphate Buffer,PB)中,即可将磁珠与DNA分离,从而得到纯化的基因组DNA溶液。
磁珠法核酸提取试剂开发难点
1.前处理问题:
1.1石蜡提取试剂盒开发策略:去交联-不用二甲苯/不同组织类型的兼容性/微量穿刺样本的处理。
1.2组织样本提取试剂盒开发策略:样本兼容性/样本前处理过程的高效率。
1.3粪便样本提取试剂盒开发策略:去除样本中的蛋白质、细胞碎片等杂质/高效破壁/区分脱落细胞和粪便微生物。
1.4 痰液样本提取试剂盒开发策略:快速前处理工艺/生物安全性。
1.5土壤样本提取试剂盒开发策略:去除土壤中的腐殖酸、多糖等杂质/消化液第一步灭活微生物,避免感染性物质扩散。
1.6 干血斑/法医/植物/低丰度样本。。。
2.提取过程:
2.1 生物安全性:尽量确保提取环境密闭,降低交叉污染。
2.2 绿色工艺:不使用有机试剂。
2.3 提取效率:快速、高效、可重复。
2.4 自动化适配度:样本量和通量的适配性,提取工艺过程编程验证。
2.5 质控指标:过程质控和结果质控。
3.提取后处理:
3.1 样本短期和长期保存: RNA易降解,合适的保存管。
3.2 样本溯源:减少人为错误。
3.3 样本下游实验验证:反向指导提取试剂盒开发,精密度、准确性验证。
分享嘉宾介绍——林佳辉
各位朋友大家好,我是林佳辉,目前定居嘉兴,担任医脉赛科技市场经理和总经理助理。目前负责全国磁珠产品、提取试剂和自动化设备的市场工作。主要对接长三角分子领域终端客户:高校、科研、疾控、企业等。
我本科和硕士都是在南京工业大学,生物工程和微生物专业,毕业后也从事了三年的研发工作,在积累了一定研发经验后,深度思考了自己的能力定位,希望通过研发转市场的角色转变,能将自己的专业知识,服务好更多的客户,交到更多志同道合的朋友。自我定位是深耕生命科学行业,能在生命科学的江湖中,发光发热,为产业发展添砖加瓦。目前的我负责的市场方向是分子流水线,期待能遇到在这方面有共同需求和理念的朋友深度交流。
医脉赛科技于2010年成立于上海张江,是一家专注于纳米磁珠技术的高科技生物技术企业。医脉赛科技拥有中国、美国双研发基地,具备完善的试剂与仪器制造生产车间和专业团队,总面积超5000平米。公司以“ 系列纯化富集设备+ 提取纯化试剂”为主营产品,覆盖核酸检测、蛋白纯化、化学发光、细胞分选等专业领域,为客户提供“超高灵敏度、高通量、自动化检测解决方案”;在病原体检测、肿瘤筛查、精准医疗、科研应用等市场,已服务于疾控、医疗系统500余家长期客户,产品远销至北美、欧洲、和中东。公司使命是:成为高品质纳米磁珠应用和整体解决方案践行者,服务生命科学,服务人类健康。
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