*仅供医学专业人士阅读参考
最近奇点糕给各位唠的癌症相关研究里，有不少都在拷打人体内沦为癌细胞帮凶的细胞，像成纤维细胞和巨噬细胞就被批过不止一次了，但奇点糕掐指一算，好像很久没看到关注肿瘤微环境内中性粒细胞的研究了？总不会是它们真就改邪归正了吧？
可惜啊，江山易改本性难移。近日，复旦大学附属华山医院陆录、钦伦秀、朱文伟牵头在Journal for ImmunoTherapy of Cancer期刊发表的研究成果，又一次实锤了中性粒细胞在肝细胞癌（HCC）免疫抑制性微环境中的“黑手”角色，并借助CRISPR筛选技术，找到了介导中性粒细胞抑制T细胞免疫功能的关键靶点——糖原合酶激酶3α（GSK3A）。
该研究揭示，GSK3A可通过NF-κB/STAT3信号轴影响HCC细胞的亮氨酸丰富α2-糖蛋白1（LRG1）分泌水平，LRG1则会促进中性粒细胞的自我趋化（self-chemotaxis），并介导中性粒细胞陷阱（NETs）的形成，由此导致T细胞的细胞毒性功能受到显著抑制；而在实验中将GSK3A抑制剂与PD-1抑制剂联合使用，有望助力HCC免疫治疗打破疗效瓶颈[1]。
论文首页截图
与既往研究“直扑”HCC微环境内中性粒细胞的做法不同，华山医院团队此次的研究始于CRISPR筛选，具体方法是将涵盖近2800个免疫相关基因的单向导RNA（sgRNA）文库转染到HCC细胞内，然后将HCC细胞分别植入免疫健全和免疫缺陷小鼠体内，如果某个基因仅能在免疫健全小鼠体内显著加速HCC肿瘤生长，那就是免疫抑制相关的候选基因。
在将初步筛选结果与人类转录组学和蛋白质表达水平对照后，研究者们确定了含Gsk3a在内的5个候选基因，又在HCC模型小鼠（免疫健全）身上将它们逐个分别敲除，而敲除Gsk3a的抑癌效应最为显著，它就成了下一步研究的主要对象，不过初步试验也显示，敲除Gsk3a或使其过表达，并不会直接影响HCC细胞的增殖、迁移、凋亡等关键属性。
影响肿瘤生长但又不直接作用于癌细胞，那机制一定与免疫微环境有关了。研究者们比对了敲除HCC细胞Gsk3a前后肿瘤微环境的免疫细胞变化，发现仅有中性粒细胞（Gr+Ly6g+）显著减少，而其它免疫细胞数量基本不变，但效应T细胞（IFN-γ+/GZMB+ CD8+）的占比明显上升，而耗竭T细胞相应减少，显然Gsk3a、中性粒细胞和T细胞三者当中“有瓜”。
敲除Gsk3a会影响HCC微环境内的中性粒细胞数量和T细胞免疫功能
体外共培养实验显示，是否敲除HCC细胞的Gsk3a，都不会使它们直接影响T细胞功能，但加入中性粒细胞后，Gsk3a未被敲除的HCC细胞就能抵御T细胞杀伤，且Gsk3a也会直接影响HCC细胞募集中性粒细胞的能力；而与Gsk3a未被敲除的HCC细胞共培养时，中性粒细胞内表达变化最显著的基因，也主要与趋化作用相关（如趋化因子Cxcl1/2/3）。
从整体上看，这些中性粒细胞的表型并不像肿瘤相关中性粒细胞普遍会分出的N1/N2表型[2]，然而研究者们敏锐地捕捉到，与NETs形成有关的Nos2基因表达也有上调，而Gsk3a水平的变化（敲除或过表达）也对应着HCC微环境内NETs的数量改变，特别是在Gsk3a过表达时，增多的NETs就会成为HCC细胞的保护罩，将细胞毒性CD8+T细胞隔绝在外，甚至NETs还会通过上调PD-L1表达，再加一道免疫抑制的保险，使T细胞望癌兴叹。
GSK3A的存在会导致中性粒细胞形成更多NETs，保护癌细胞不被T细胞杀伤
最后，研究者们明确了癌细胞GSK3A调控中性粒细胞形成NETs的具体机制：GSK3A会经由NF-κB/STAT3信号轴诱导HCC细胞分泌LRG1，而既往研究已经揭示，LRG1能通过自分泌效应，诱导并放大中性粒细胞的自我趋化[3]，促进NETs形成来抑制T细胞功能，本次研究也再度证实了相关发现。初步细胞实验也证实，已有的GSK3A抑制剂（SB216763）能够与PD-1抑制剂协同增效，增敏HCC免疫治疗的潜在方案又喜+1啦
一图总结论文核心内容
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参考文献：
[1]Zheng X, Yang L, Shen X, et al. Targeting Gsk3a reverses immune evasion to enhance immunotherapy in hepatocellular carcinoma[J]. Journal for ImmunoTherapy of Cancer, 2024, 12(8): e009642.
[2]Masucci M T, Minopoli M, Carriero M V. Tumor associated neutrophils. Their role in tumorigenesis, metastasis, prognosis and therapy[J]. Frontiers in Oncology, 2019, 9: 1146.
[3]Yu B, Yang L, Song S, et al. LRG1 facilitates corneal fibrotic response by inducing neutrophil chemotaxis via Stat3 signaling in alkali-burned mouse corneas[J]. American Journal of Physiology-Cell Physiology, 2021, 321(3): C415-C428.
本文作者丨谭硕
