【衡道丨干货】四种常用的特殊染色以及制片常见问题与解决方法

学术 2024-11-11 19:00 广东

六氨银染色

刚果红染色

维多利亚蓝-丽春红S染色

AB-PAS染色

六氨银染色

真菌又称霉菌，是一类具有典型细胞核和细胞壁的真核细胞型微生物，其种类较多，分布也较广泛，常见的致病菌有曲霉菌、毛霉菌、新型隐球菌、白假丝酵母菌等多种。近年来，抗生素、免疫抑制剂、抗肿瘤药物的广泛应用，各种插管、介入诊疗技术开展、艾滋病等增加使得机体免疫功能下降，导致真菌感染日益增加，因此更需进一步提高染色的准确性。

真菌HE染色一般效果不佳，因此需要特殊染色来显示判别，六氨银法对显示真菌菌体形态结构效果较佳。

染色原理

铬酸氧化真菌内多糖化合物而暴露醛基，醛基还原六氨银溶液内银离子成为黑色的金属银；氯化金用来调色，可排除组织中的黄色色调；硫代硫酸钠对已显示的银盐起固定作用并除去未反应的银离子。

染色结果

各种真菌均被着色。菌丝和孢子呈黑褐色，背景呈不同程度的黄色。

常见问题及解决方法

真菌菌体黑褐色着色较浅淡，阳性不明显。

可能原因：

①铬酸溶液氧化时间过短。

②六胺银硼砂染液作用温度过低或作用时间不够。

解决方法：

①5%铬酸溶液氧化时间不短于1h，或将浓度由5%调整为8%，作用时间则可缩短至20~30min。

②六胺银硼砂染液可在染色前提前预热,作用时镜下观察控制菌体着色程度。

刚果红染色

淀粉样物质在HE染色中呈淡红色无定形的均质状，其性质是一种蛋白质，90%为淀粉样原纤维蛋白，10%为糖蛋白。淀粉样物质在细胞外间质内异常沉积称为淀粉样变，可分为原发性和继发性，根据范围分为全身性和局灶性。原发性全身性疾病淀粉样物质常沉积于心脏、皮肤、舌等组织。继发性全身性疾病淀粉样物质累及以肝、肾、脾为主，常见于慢性感染性疾病如慢性结核病、慢性化脓性骨髓炎等；继发性局灶性淀粉样物质多见于阿尔茨海默病的脑组织、甲状腺髓样癌等。

染色原理

刚果红是一种偶氮染料，它对淀粉样物质有很强的亲和力，它以氨基和淀粉样物质的羟基进行结合，平行地附着在淀粉样物质的原纤维蛋白上而显色，在偏光显微镜下呈特征性的苹果绿双折光性，对诊断和实验研究具有重要的意义。

染色结果

淀粉样物质在光镜下呈红色，偏光显微镜下成苹果绿双折光性，细胞核呈蓝色

常见问题及解决方法

组织背景不干净，着色重

可能原因：

碱性乙醇分化时间不够。

解决方法：

此染色法分化步骤较难控制，分化数秒光镜下观察，如背景较重须再分化。

维多利亚蓝-丽春红S染色

弹力纤维在人体中分布较为广泛，遍及全身各部位，在皮肤真皮、血管壁、肺等部位含量最为丰富。弹力纤维粗细不等，表面光滑，断端常卷曲，其由均质的弹性蛋白和微原纤维组成，弹力蛋白分子借共价键广泛交联成网，能够任意卷曲，微原纤维主要由较大的原纤维蛋白构成。弹力纤维在HE染色中和胶原纤维均被染成淡红色，两者较难区分，特殊染色如维多利亚蓝一丽春红S染色法能够较好地显示。弹力纤维染色常用于观察皮肤组织中弹力纤维的变化情况，如增生、减少、卷曲、破碎、变性甚至落解及消失等改变；在肿瘤的诊断中也有较大帮助，如弹力纤维瘤、肺癌胸膜侵犯情况等均需借助弹力纤维特殊染色方法来进一步鉴别。

染色原理

维多利亚蓝是一种阴离子染料，它通过与组织中的胶原蛋白结合来染色胶原纤维，而丽春红S则是一种阳离子染料，能够与肌肉纤维中的成分结合。这种染色方法能够清晰地显示组织中不同类型的纤维。

染色结果

弹力纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。

常见问题及解决方法

呈蓝色的弹力纤维与背景对比不清楚。

可能原因：

维多利亚蓝染液作用后，70%乙醇分化时间过短。

解决方法：

维多利亚蓝染液作用后直接用70%乙醇分化，可采用滴洗方式进行，直至组织上不再脱出蓝色即止，并在显微镜下观察。

AB-PAS染色

人体中的各种腺体、组织和细胞都能产生或分泌黏液物质。黏液物质中所含酸基的不同，又分为中性黏液物质和酸性黏液物质。中性黏液物质含氨基己糖和游离的己糖基，不含任何酸根，主要存在于胃黏膜的表面上皮、幽门腺、十二指肠腺、颌下腺、前列腺上皮和结肠的杯状细胞等处。酸性黏液物质中含有氨基己糖，并含有各种酸根和部分不含酸根的成分，其基质成分以硫酸化黏液物质和非硫酸化黏液物质两种形式存在，强硫酸化黏液物质主要见于角膜、肥大细胞、皮肤、软骨、动脉、肺等处，弱硫酸化黏液物质主要见于颌下腺、结肠、气管及支气管的杯状细胞和腺体。

黏液物质染色可用于某些病理情况下结缔组织、心肌等出现的黏液性水肿和黏液样变性等改变;某些黏液性肿瘤如黏液瘤、黏液肉瘤、软骨黏液样纤维瘤、胃印戒细胞癌等均有黏液物质的存在。

染色原理

高碘酸是一种氧化剂，组织切片首先经高碘酸溶液氧化，使存在于组织内多糖分子的乙二醇基或氨羟基的碳键打开，生成醛类化合物，暴露出来的游离醛基与希夫试剂作用，生成新的红至紫红色复合物而得到定位。爱先蓝是一种类铜肽花青染料，与组织内含有的阴离子基团如含羧基和硫酸根的酸性黏液物质的羧基和硫酸根形成不溶性复合物呈蓝色。

染色结果

酸性黏液物质呈蓝色，中性黏液物质呈红色，中性和酸性黏液物质混合物呈紫红色，细胞核呈蓝色

常见问题及解决方法

黏液物质蓝色着色过淡。可能原因：配置染液所用爱先蓝试剂质量纯度不高或质量不好。解决方法：爱先蓝试剂质量直接影响染色效果，选择试剂注意纯度。

本文转载自病理海

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