位于骨骺与骨干交界处的软骨生长板(growth plate,简称GP)。作为一个活跃矿化的动态位点,提供了一个独特的机会来研究细胞调节的基质矿化过程。透射电子显微镜(TEM)提供了一种直接观察这些机制的手段,提供了必要的分辨率和化学分析能力。然而,由于矿物结晶度在使用水固定方案时容易产生伪影,因此样品制备技术对于保持矿化组织的原始形式至关重要。
近期,伦敦国王学院Roland A Fleck/帝国理工学院Alexandra E Porter等开发了一种用于TEM成像的新冷冻固定制备路线,该路线揭示了骨骺软骨中细胞调节的矿化过程。
本文要点:
(1)本文通过高压冷冻优化了冷冻,然后在含有0.5% 乙酸铀酰的无水丙酮中冷冻替代,以制备用于TEM分析的小鼠GP。
(2)该样品制备工作流程保持了细胞和细胞外蛋白质结构的完整性,具有足够的对比度以供观察,并且不会影响矿物结晶度。
(3)高分辨率TEM图像显示线粒体以及细胞内和细胞外囊泡参与向胶原原纤维输送瞬时矿物相以促进软骨矿化。
总体而言,本文开发的方案将有利于骨骼研究,以提供更好的对骨矿化的理解。这些技术可以适用于理解软组织(如心血管、眼部、大脑和平滑肌)中病理矿化的基于细胞的起源。
文章来源:
https://doi.org/10.1016/j.actbio.2024.11.015