主要内容:
推荐意见1:天然BEVs的命名应至少涵盖细菌菌种来源,同时可以缩写属名以保证名称的洁性。(证据质量:中;推荐等级:弱推荐);
推荐意见2:工程化BEVs的命名应主要反映母细菌来源与工程化物质,命名原则需在研究中明确定义。(证据质量:中;推荐等级:弱推荐);
推荐意见3:在扩大培养菌株时,应注意避免污染,根据不同菌株选择特定的培养条件,评估菌株的代数,并在适宜的生长时间收集细菌培养液,计算细菌数以便后续量化BEVs产量;采用差速离心法进行预处理。证据质量:高;推荐等级:强推荐);
推荐意见4:不同的生物体液具有不同的理化特性,样本黏度、体积和处理模式决定了 BEVs分离回收率和纯度,应针对不同同的生物体液样本选择适宜的前处理方法。证据质量:高:推荐等级:强推荐);
推荐意见5:粪便样本应充分悬浮在缓冲溶液中,再使用差速离心法去除粗纤维、细菌等干扰成分。样本稀释比例(w/v)影响BEVs回收率和纯度评估并选择合适的比例至关重要。证据质量:高;推荐等级:强推荐);
推荐意见6:组织BEVs研究优先使用新鲜组织样本。使用机械力或酶对组织进行温和、充分地解离,应注意评估不同酶类型、浓度与作用时间对BEV分离纯度、回收率和完整性的影响。证据质量:中;推荐等级:弱推荐);
推荐意见7:对于细菌培养上清等大体积样本,使用UC和DGC可在较低的成本下获得相对高效的提取率;对于体液、粪便等小体积的样本,UF可用于BEVS分离;免疫磁珠分离法根据BEVs的特异性抗体可实现小体积的复杂基质的特异性分离。(证据质量:中;推荐等级:强推荐);
推荐意见8:未能及时处理的样本应进行必要的前处理后分装保存于-80℃;已分离得到的BEVS应在-80℃保存。避免反复冻融。证据质量:高;推荐等级:强推荐);
推荐意见9:通过浓度大小和形态对BEVs进行表征,是进行BEVs质量控制重要且必须的步骤:保障后续研究的关键,建议采用 NTA技术对 BEVs浓度和大小进行表征,采用TEM对BEVs形态进行鉴定。证据质量:高;推荐等级:强推荐);
推荐意见10:目前尚无通用的BEVs标志物,可以通过组成 BEVs的脂质成分、外膜蛋白、特定基因及特殊蛋白对不同来源的BEVs进行鉴定。(证据质量:低;推荐等级:专家建议)
推荐意见11:对于有已知序列的核酸检测,推荐使用PCR;对于未知的核酸检测,可使用二代测序、基因芯片技术,该方法可以用于分析和验证BEVs中核酸含量。证据质量:高;推荐等级:强推荐);
推荐意见12:BEVs脂质组学分析推荐使用LC-MS/MS法,并根据研究目的来确定进行靶向或非靶向分析,特定脂质定性或定量可选用靶向分析,未知成分采用非靶向分析。(证据质量:高;推荐等级:强推荐);
推荐意见13:BEVs蛋白质组学分析推荐使用质谱法,并根据研究蛋白是否已知,选择SRMIPRM或 DDA/DIA 模式。(证据质量:高;推荐等级:强推荐);
推荐意见14:对于未知的代谢物分子,推荐使用非靶向代谢组学,而特定一类代谢物的研究,推荐使用靶向代谢组,并利用生物信息库数据进行验证。(证据质量:高;推荐等级:强推荐);
推荐意见15:多个数据库联用分析BEVs相关生物信息。(证据质量:高;推荐等级:强推荐)。