01 试剂交叉污染了,怎么办?
使用全自动生化分析仪的过程中,经常会遇到这样的情况:单独做某个项目时结果没有问题,可是将它与某些项目组合在一起时,结果却出现异常。其中的原因是全自动生化分析仪的清洗系统随着仪器使用时间的累加,清洗效果逐渐下降,试剂交叉污染的程度增加所致。
因此,避免试剂间的干扰在日常生化检验工作中也就非常重要和迫切。
02 试剂相互干扰的类型
试剂中含有下一个检测所要测定的底物,或是含有的某种试剂成分与下一反应的底物有作用,因而直接干扰下一反应的测定结果。
另一种原因是该试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰,因为在有试剂污染的情况下,下一个测试所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。
03 部分已知的常用试剂间可能产生相互干扰如下
① pH 值改变试剂中反应缓冲液之间因仪器携带污染而使下一反应的 pH 值改变,使下一反应达不到最佳状态。
如双缩脲法测血清总蛋白,若其他条件相同,反应在碱性 (pH 值 8~9) 条件时,蛋白肽键(—CONH)才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应,完全测出血清蛋白的总量。
若 pH<8 时,总蛋白测定结果偏低,直接影响球蛋白、白蛋白 / 球蛋白的结果。酶活力测定在最适 pH 值时,反应最快,灵敏度最高,但是因为缓冲能力有限,可因携带污染使酶促反应出现无效值。
大多数酶反应 pH 值在 6.0~7.5 之间;ALP、γ-GT、LDH 须在碱性条件下最适宜。
② TG、T-CH、UA、MG 试剂中含有胆酸盐,对循环酶法测定胆汁酸能产生严重干扰。
③ ALT(IFCC)、AST(IFCC)试剂中含有高活力 LD 成分,有可能会对 LD 的测定带来干扰。
④ CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)试剂中含有 Glu 成分,其分析方法的原理中包含 Glu 的已糖激酶 (HK) 反应过程,因此可能对 Glu 测定带来干扰,尤其对 Glu 的 HK 法测定可能带来严重干扰。
⑤ Glu (HK)、CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)、TG、HDL-C、LDL-C (直接法) 等试剂中使用了镁盐,可能会对其后的 Mg2+ 测定带来干扰;TP 试剂中高浓度的 Cu2+ 对 Mg2+ 测定也会产生干扰。
⑥ ALT、AST、LDH、CK、CK-MB、UA、r-GT、TP,LDH 等试剂由于试剂中含有 K+,与 K+ 的酶法测定有相同或相反的进程,对 K+ 的酶法测定产生干扰。
⑦ChE (Butyrylthiocholine)、TC (ChOD-PAP)、Glu (GOD-PAP)、 UA (Uricase)、 α-HBDH (DGKC) 等试剂使用磷酸缓冲液,可能会对无机磷的测定带来干扰。
⑧ Mg2+ 试剂 (Calmagite) 中含有 EGTA 成分,为 Ca2+ 络合剂,可能对 Ca2+ 的测定带来干扰。
⑨ CK 检测不应在 ALP、Ca 检测之前,因 CK 反应液中加入 EDTA-Na,能抑制 ALP 活性,结合 Ca 而使结果偏低。
⑩ BUN 酶法测定因谷氨酸脱氢酶(GLDH)消耗 NADH,不能放在底物 NADH 如 ALT、AST 项目前检测。
04 干扰的排查和发现
事实上各个厂家所提供的产品说明书常不能够全面反映试剂组成的情况,而生化反应的影响因素又是相当复杂的。
因此,通过实验发现试剂交叉污染可能带来的干扰显得更加重要。
05 干扰的消除
同时,要求检验人员对仪器的工作状态要了如指掌,并在一个样本的项目选择或一个样本的最后一项与下一样本的第一个项目选择时对于试剂交叉污染的可能性加以考虑,合理安排项目顺序,以便得到更为合理的结果。
P、Alb、DBIL、TBIL、K、Ca、CK、TBA、TG、AFU、ALT、CK-MB、APOA1、T-CH、APOB、Cl、HDL-C、LP(a)、AST、GPDA、AMY、LDL-C、BUN、UA、CHE、ADA、r-GT、Mg、Na、ALP、LDH、GPDA、TP、Cr。
通过以上几种方法,大部分试剂间的交叉污染能够被解决,实际工作中,用全自动生化分析仪进行连续的多个项目的测定,每个反应的详细过程难以探知。
要求我们在实际工作中必须对生化分析仪的工作原理,方法,流程,状态非常了解,还须对试剂的组成,反应原理作深入的分析,理论分析结合实际应用,方可以摸索出一套符合本单位工作的方法。