Cargo Therapeutics 成立于2019年，是一家技术来源于斯坦福的细胞治疗公司。首发管线为 Firi-cel，是靶向CD22的CAR-T，第一个适应症是针对r/r LBCL CD19 CAR-T复发的病人，Phase 1 CR率53%（20/38），P2RD mOS 25.7 months（n=29)。CRGX还在开发一种新型 tri-specific CAR-T，靶向CD19&CD20&CD22， 用于治疗B细胞恶性肿瘤，临床前数据展现出初步潜力，预计将于2024年进入临床。除此之外，公司还在生产方面进行了一些创新，希望能实现CAR-T的中心化供应，解决现在行业普遍存在的产能不足的问题。

一、背景介绍

1. Post CD19 CAR-T 的临床未满足需求

目前在DLBCL领域，有三个靶向CD19的CAR-T获批，分别是Yescarta (GILD)、Kymriah (NVS) 和 Breyanzi (BMY)。

Gilead的Yescarta是第一个获批的CD19 CAR-T，也是疗效最好的，首次于2017年1月批准用于2线全身治疗后的3L LBCL。2022年4月，根据ZUMA-7结果，Yescarta扩展到2L r/r LBCL一线化学免疫疗法post first-line chemoimmunotherapy (R-CHOP) 后，Yescarta的销售额迅速增长，从2L批准前2019-2021年的4-7亿美元，到2022年的12亿，到2023年的15亿美元。

CD19抗原表达缺失antigen loss或抗原逃逸antigen escape被认为是导致疾病复发或耐药的主要机制之一。尽管在ALL中更为普遍，但30-50%的DLBCL患者也可能会出现CD19抗原丢失：在ZUMA-1中，33% (7/21) 在Yescarta后病情进展的患者CD19阴性；在斯坦福大学接受Yescarta治疗的34名患者中，16名患者病情进展，12名患者在病情进展时进行了活检，50% (6/12) 显示CD19抗原丢失。

在对CD19 CAR-T细胞疗法有抗性或耐药性的患者中，CD19抗原表达丢失后，其CD22表达通常会保留。与CD19类似，CD22是一种B细胞特异性抗原，在81-100%的DLBCL患者的正常B淋巴细胞中广泛表达，且异质性很大。

斯坦福大学的早期研究中，往3名患者注入了flu/cy和CD22 CAR，在检查时发现患者在CAR19治疗后CD19下调，在CAR20/19治疗后CD19表达完全丧失，但这三名患者的CD22表达仍然保持在高水平。Cargo目前的两款资产都覆盖了CD22抗原。

二、Pipeline

I. Firi-cel (CRG-002) 

1. 结构设计 CAR-T construct

1.1 Membrane proximal binding - 通过近膜端蛋白结合增强结合亲和力

针对CD22靶点设计抗原的方法多种多样。比如BL22、epratuzumab、inotuzumab ozogamincin这三种抗CD22抗体都已进入临床试验阶段，它们都与CD22的N端区域结合，但在LBCL中未显示出最佳效果。N端区域靠近CD22与配体和细胞表面受体相互作用的区域，鉴于CD22与各种细胞系之间的复杂相互作用，针对靠近相互作用的N端的治疗性抗体可能具有inconsistent binding，因为CD22可能会有不同的conformations并在不同的细胞表面暴露不同的表位varying epitopes，从而难以精确结合。

Cargo的方法是与该区域中靠近细胞膜的非重叠表位non overlapping epitopes结合，该区域不参与相互作用，因此干扰较少，CRG-022可以实现对CD22更一致和更具体的识别，并且可以改善CAR-T信号传导和进行更强的结合。除此之外，通过靶向靠近膜的区域，则增加了更接近细胞内共刺激结构域 intracellular costimulatory domains 的可能性，从而可以提高信号传导和细胞扩增。

1.2 Short linker 

CD22 CAR的精细处理的另一个关键是短连接子short linker。Linker的长度和序列对CAR的结构和功能特有重大影响，例如CAR表达、寡聚状态 oligomeric state、亲和力、稳定性和体内活性。

Cargo发现使用短CD22 scFv连接子会增加二聚化dimerization，这是与细胞表面受体结合时的主要信号传导事件。因此，通过改善信号传导，更强的结合力以及更高的特异性，CRG-022将能够实现更强的有效性。

Upenn曾对CD22 CAR进行过研究，该CAR具有与CRG-022相同的结合域，但连接子更长，结果发现其体外活性和两项临床试验均有所降低，且持久性更差：在两项针对r/r CD22+ ALL的试验中，50% (4/8) 的患者获得了CR，但所有患者均出现CD22+疾病进展。

1.3 4-1BB Costimulatory Domain

共刺激域的选择对CAR-T细胞的持久性persistence和记忆表型memory phenotype具有重要影响。与一些利用CD28共刺激域的获批CAR-T疗法相比，CRG-022的CAR包含4-1BB共刺激域，这在肿瘤模型中与更少的AE和更好的临床疗效相关。

1.4  Fully human antigen-binding domain

全人源化抗原结合域，这可能会降低排斥风险。

2. 临床数据 - r/r LBCL Stanford Phase 1 Clincial Trial

入组基线：研究对象为41名 r/r LBCL 患者，平均年龄65岁。患者均heavily pre-treated，平均接受过4线前序治疗，除了有一名患者因为CD19 negative以外，所有患者都接受过CD19 CAR-T治疗。CAR-T生产成功率为95% (38/40)。一名患者在leukapheresis前退出研究，2名患者由于T细胞有限且无法制造而未接受CRG-022，最终38名患者成功接受治疗。

CAR-T细胞产品在自动化、封闭式Miltenyi CliniMACs Prodigy设备中制造。用single-cistron-encoded CD22.BB.z-CAR的慢病毒载体转导并扩增，共计7-12天。

病人在白细胞分离后可以进行桥接治疗，如果使用放射治疗，则至少一个可测量部位需要未接受治疗。 Lymphodepletion conditioning包括fludarabine（每天 30 mg/m2 体表面积）和cyclophosphamide（每天 500 mg/m2， -5、-4 和 -3 天）。第0天以DL1目标剂量每公斤1 × 10⁶ CAR+ 细胞（dose level 1）或DL2每公斤3 × 10⁶ CAR+ 细胞（dose level 2）静脉输注CAR22。

最初以dose level 1治疗3名患者未出现dose-limiting toxicities。随后，9名患者接受dose level 2治疗，其中2名出现DLT：1名患者出现可逆性3级left ventricular systolic dysfunction，同时伴有3级肺水肿pulmonary edema，1名患者出现持续性3级丙氨酸氨基转移酶 alanine aminotransferase 天冬氨酸氨基转移酶aspartate aminotransferase升高，且与4级IEC-HS 有关。后一名患者在接受IEC-HS治疗后，因肺炎克雷伯菌Klebsiella pneumoniae感染性休克导致多器官衰竭而死亡。降至dose level 1后，又有26名患者（共 29 名）接受治疗，未观察到剂量限制性毒性。

截至公司上市的时候，CRG-022的ORR为68% (26/38)，CR率为53%(20/38)；Phase 2选择了DL1 - 1x10^6 CD22 CAR+ cell/kg，ORR为66% (19/29)，CR为52% (15/29)。

最近在Lancet上发表的临床结果：

DL1和DL2之间的response rate相似，median duration of response为27.8个月。总体ORR为68%（95% CI 51-83），CR率为53%（36-69）。所有患者的mPFS为3.0 个月（1.8-NE），6个月的PFS率为47%。所有患者的mOS为14.1 个月（9.1-NE)，是晚期 CD19 CAR T 复发/难治患者典型的 5-7 个月生存率的两倍多，其中CR 患者的duration非常好。

安全性上，CRS和ICANS副反应属于正常范围，或者低于其他CAR-T，但需要注意下IEC-HS的副作用。

CAR-T细胞疗法的副作用里有噬血细胞性淋巴组织细胞增生症hemophagocytic lymphohistiocytosis  (HLH)，这个是由于患者的组织细胞和淋巴细胞被注入的CAR-T细胞过度激活，导致过度炎症，严重的可能会死亡。在其他疗法中，接受CD19 CAR-T细胞治疗的儿童ALL患者中约15%和DLBCL患者中约6%观察到HLH。最近，这种毒性被重新归类为免疫效应细胞 HLH 样综合征 immune effector cell HLH-like syndrome (IEC-HS)。

在接受CRG-022 DL1治疗的患者中有7%出现IEC-HS，DL2 中有33%，共有18%，使用anakinra和steroids来manage。IEC-HS发生率升高是选择 DL1作为前进剂量的主要原因，并且IEC-HS是CRG-022未来开发中需要重点关注的毒性。

3. r/r ALL Stanford&NCI Phase 1 Trial

ALL是一个规模较小的市场，目前不是CRG-022的开发重点，但斯坦福大学和NCI也对儿童和成人r/r ALL进行了早期研究和I期临床试验。在两项研究中，均观察到较高的CR率（70-100%）以及较高的MRD阴性率。在NCI研究报告的安全性结果中，CRG-022具有较低的Gr3+ CRS或神经毒性。

4. Pivotal Trial Timeline

Pivotal trial于2023年9月开始进行，预计中期结果将于2025年公布（6 months follow-up）。

计划招募123名患者任何水平的CD22表达患者，dose 101名患者：包括约81名之前接受过CD19 CAR-T治疗的患者（第 1 组），约20名之前接受过CD20双抗体治疗的患者（第 3 组)，以及一些比较灵活的组（第 2 组）。主要终点是ORR，关键次要终点是CR、DoR、PFS/OS和安全性。

II、CRG-023 - CD19&CD20&CD22 CAR-T

CRG-023是一种tri-specific CAR-T，靶向三种B细胞抗原（CD19、CD20 和 CD22），旨在治疗多种类型的B细胞恶性肿瘤。通过靶向三种抗原，可能能够减少因抗原丢失或突变而导致的复发。此外，CRG-022表达了Cargo专有的CD2技术，该技术旨在提高CAR-T疗法靶向突变或CD58表达降低的肿瘤的能力。

1. CD2 平台

Cargo的CD2平台技术有可能降低CD58介导的CAR-T耐药性。CAR-T细胞的疗效不仅取决于对靶抗原的识别，还取决于与T细胞上的一种或多种共刺激受体 costimulatory receptors（如 CD2）以及肿瘤细胞表面表达的配体（如 CD58）的相互作用。肿瘤细胞可以通过下调与共刺激受体costimulatory receptors相互作用的配体的表达来对T细胞介导的疗法产生耐药性。

CD19 CAR-T疗法治疗的LBCL患者中约有25%的CD58突变或缺失，67%的CD58表达降低。这些患者对抗CD19 CAR-T疗法反应不佳，预后比wild type CD58蛋白和表达水平的患者更差。例如，在一项对51名接受 Yescarta 治疗的DLBCL患者的研究中，CD58突变或缺失患者的mPFS为3.1个月，而使用Yescarta后12个月存活的野生型CD58患者约为60%。此外，CD58突变或缺失患者只有30%达到CR，而野生型CD58表达患者达到80%。

为了克服这种耐药机制，Cargo设计了一种CD2结构，当CAR被激活时发出信号，与肿瘤细胞上是否存在野生型CD58无关，可以让CAR-T细胞在CD58突变或表达较差的肿瘤中被激活。在一项表达CD22的急性淋巴细胞白血病细胞系CD22-expressing acute lymphoblastic leukemia cell line (NALM6) 的实验中，CD22 CAR-T细胞显著杀死表达CD58的白血病细胞，但对CD58敲除细胞无影响。尽管表达CD19，但无论CD58表达CD2如何，NALM6均未受到CD19靶向CAR-T细胞的显著杀伤。但是，表达CD2技术的CD22和CD19共靶向CAR-T细胞分别杀死了约90%的野生型和约70%的CD58敲除NALM6细胞。这些数据表明CD2技术可以显著提高CD58表达较差的肿瘤中的癌细胞杀伤力。

2. STASH 平台

Cargo的细胞疗法需要进行多种基因改造来解决耐药性、增强持久性和提高耐受性。由于平台需要多个有效载荷，而这些载荷无法装入单个病毒载体中，因此自体T细胞会感染多种慢病毒。然而，T细胞可能不会持续被所有亚型的慢病毒感染，因此可能无法表达正确的therapeutic transgenes combination组合。

STASH平台可以使用MACSpurification 和生长优势growth advantage (GAS) 仅选择同时表达最多三种所需转基因的T细胞。为了纯化具有所有所需genetic modifications的细胞，STASH平台会在细胞表面标记STASH成分。每个viral construct都会表达一种独特的成分，该成分本身无法定位到细胞表面。但是，当所有病毒构建体和相应的STASH成分在受体细胞中成功表达时，标签就会定位到表面，从而可以通过MACS纯化进行选择。这样一来，就可以将表达所有转基因的同质CAR-T细胞群筛选出来。

3. 临床前数据

多项临床前研究证明，即使在CAR-T靶向的三种抗原之一缺失的情况下，CRG-023也可以target到肿瘤。为了评估CRG-023中表达的每种CAR的功能，Cargo生成了敲除Nalm6细胞系，并评估了mono-specific和tri-specific CAR-T细胞的激活情况，以IL-2分泌为衡量标准。三特异性CAR-T细胞能够诱导与单特异性CAR-T细胞相似水平的 IL-2。这些数据证实，CRG-023表达的每种CAR都具有独立的活性。

除此之外，Cargo比较了其CRG-02三特异性疗法与单特异性CAR-T的体内活性。将表达荧光素酶luciferase、CD19、CD20和CD2的Raji细胞（一种非霍奇金淋巴瘤 B 细胞系）注射到人源化NSG小鼠体内。四天后，注射3M CAR-T细胞，并通过生物发光通量bioluminescent flux测量肿瘤负荷。虽然单特异性CAR-T可有效部分减轻肿瘤负荷，但CRG-023将生物发光降低到背景水平，表明肿瘤负荷完全消失。

为了评估肿瘤antigen loss如何影响CRG-023的疗效，Cargo生成了三种，抗原之一被敲除的Raji细胞系。将1:1:1的CD19-KO、CD20-KO和 CD22-KO生物发光Raji细胞混合物注射到人源化NSG小鼠体内，并在第4天注射CRG-023、CD22或CD19 CAR-T。单特异性CAR-T无法控制肿瘤，而CRG-023可将肿瘤负担降低至背景生物发光水平，持续30天。这些临床前数据表明CRG-023可以在一种抗原未表达的情况下（例如在耐药的情况下）减轻肿瘤负担。

目前CRG-023正在进行IND-enabling study中。

Cargo的首席技术官Shishir Gadam博士曾任BMS/Juno全球细胞治疗制造科学和技术副总裁，负责 Breyanzi 和 Abecma 的launch。Cargo的manufatucuring是基于Gadam博士的经验专门设计的。在加入BMS之前，Gadam博士曾在Genentech担任生物技术开发和运营方面的各种领导职务，负责产品和工艺生命周期管理、技术转移和制造。

在斯坦福I期临床试验中，CAR-T制造成功率为95%，平均周转时间为18天，扩增期为5天。两名未能完成CAR-T生产的患者是由于之前接受过治疗而没有足够的T细胞。

在I期研究中，患者接受的是新鲜或冷冻保存cryopreserved的细胞。管理层指出，在冷冻后和扩增过程中未观察到任何的contraction或viability issues。慢病毒转导是使用adherent-based LV platform，T细胞在harvesting和手动配制之前扩增了7-11天。

中心化生产的尝试：CARGO正在使用从两步冷冻过程 two-step freezing process中的血液分离后cryopreserved血液中提取的CAR-T进行其pivotal trial。管理层希望centralize manufacturing将制造集中到单个制造基地，以改善slot management并远距离治疗患者。

T细胞富集将在解冻的细胞上进行，不会deplete Treg或manipulate CD4/CD8比率，改为基于悬浮液的慢病毒转导suspension-based lentiviral transduction，以降低COGS并提高reliability。细胞扩增方案使用与I期试验相同的细胞因子配方，在扩增过程中加强了控制。灌装/完成将实现自动化。模块化设计和升降流程将实现可扩展性，因为这些流程可以更轻松地转移到新的CDMO。这与其他CAR-T细胞产品不同，这些产品的关键试验是在新鲜血液制成的CAR-T上进行的，而这些产品需要在关键试验后对冷冻细胞进行可比性研究。

Cargo计划使用3个CDMO， 2个关键试验，1个商业化规模生产，他们的质粒、载体物质和载体产品供应链已建立，可用于pivotal trial和商业化。悬浮生物反应器可产生高滴度，每批可转导300-500名患者。Cargo的载体成本低于每位患者5000美元，比竞争对手低约8倍。

四、管理层

CEO Gina Chapman: 2022年5月加入Cargo，拥有30多年生物制药商业和运营经验,在 Genentech/Roche工作了15年，担任高级副总裁兼业务部门主管。

CFO & CBO Anup Radhakrishnan: 2022年8月加入Cargo，拥有20多年生物制药财务领导经验。Anup在Genentech工作了11 年，还曾在Elan Pharmaceuticals（被Perrigo收购）、CV Therapeutics（被Gilead收购）工作。

CMO Ginna Laport：在加入Cargo之前任Genentech/Roche的临床开发副总裁、NHL/CLL全球负责人，负责NHL/CLL后期产品线的战略开发。在Genentech参与了治疗淋巴瘤的CD20xCD3双抗Lunsunio (mosunetuzumab) 和 Columvi (glofitamab) 的开发和获批。此前，Laport博士还曾担任Tempest Therapeutics公司的首席营销官以及斯坦福大学医学院血液和骨髓移植科的医学教授。

五、市场规模和价格

根据Jefferies的预测，认为随着使用Yescarta的患者数量不断增加，CD19 后患者数量也在增长，估计CD19后WW约有4k患者符合CRG-022治疗。

如果按照跟CD19 CAR-T一样的价格，假设2027年获批，则2035年之后peak sales 大约$750mn。

Cargo IPO发行价格为$580mn，上市后最高market cap达到过~接近$1.5bn，此后在二级市场进行过一次$110mn的PIPE融资，目前市值8亿多美金，账面现金4.4亿美金，EV~3亿美金多。

拥有好资产的CAR-T公司市值普遍比较高，比如传奇生物单资产上市市值100亿美金，Arcellx BCMA CAR-T 还在pivotal trial市值33亿美金，BCMA CAR-T的市场规模普遍认为是$5bn，按照市场规模比例来估值那么CRG-022同时间段合理的市值区间可能在1/7左右。Carvykti获批那段时间传奇生物市值大概70亿美金左右，由于是50%revenue share，所以按照 7bn/50%/7 = 2bn，也就是2027-2028年大概20亿元美金。按照65%的POS和WACC 15%，现值 = 2bn*65%/（1+15%）^(2028-2024) = $740mn。

一些潜在的upside：CRG-022直接上CD19 naive的patient且有优效；CRG-023临床数据优秀，市场可大大扩展；或者像其他CAR-T公司一样突然跑去开了一个自免trial之类的...

六、讨论

临床数据 - Cargo目前的临床数据非常亮眼，但 leading program CRG-022 I期数据仅来自单一中心，将复杂的CAR-T临床试验转移到多中心，II期重现I期的好结果也许存在一定不确定性。

临床进展 - pivotal trial计划入组100多人，但是到现在开了都3个Q才入组了23人，感觉timeline很有可能会delay。

Cash burn - 虽然公司目前账面现金很多，但是美国做CAR-T临床试验实在是太贵了，平均每个病人入组成本在100万美金以上，所以公司烧钱会很快。这时不得不感慨CAR-T这个modality还是中国先做IIT进行POC，再bridge到美国做pivotal trial的性价比最好。

市场 - Post CD19 CAR-T 后是一个可能会没那么大的市场，60%的患者有进展那也就是大概3-4k 名患者，两次CAR-T治疗的经济学和病人心理承受问题也需要考虑，所以如最终市场规模还不确定。

期望公司临床成功，发展顺利，给血液肿瘤病人带来更多的选择。

References：

Cargo Therapeutics - Company Presentation 

TD Cowen Research

Jefferies Research

Survival with Axicabtagene Ciloleucel in Large B-Cell Lymphoma，Published June 5, 2023，N Engl J Med 2023;389:148-157| DOI: 10.1056/NEJMoa2301665| VOL. 389 NO. 2

CD22-directed CAR T-cell therapy for large B-cell lymphomas progressing after CD19-directed CAR T-cell therapy: a dose-finding phase 1 study，Lancet 2024; 404: 353–63

The CD58-CD2 axis is co-regulated with PD-L1 via CMTM6 and shapes anti-tumor immunity. Cancer Cell. 2023 Jul 10;41(7):1207-1221.e12. doi: 10.1016/j.ccell.2023.05.014. Epub 2023 Jun 15. PMID: 37327789; PMCID: PMC10524902.