DNA遗传物质
核酸(nucleicacid)是生命体遗传信息的主要载体。1953年Watson和Crick关于DNA双螺旋结构的发现表明，几乎所有基因的三维结构基本一致，A、T、C、G（RNA中为A、U、C、G）4种碱基数量和排列顺序的变化造就了生命体的多样性。因此DNA和RNA序列被称为遗传密码，是分析基因结构、功能及其相互关系的基础，也是临床疾病分子诊断最精确的判定依据。基因测序技术正是解读这些生命密码的基本手段。在进行DNA测序以前，人们通常只能进行染色体级别的研究。
高通量测序概述
高通量测序(high-throughput sequencing, HTS) 即下一代测序(next generation sequencing, NGS)，又称为大规模平行测序(massively parallel sequencing，MPS)，最早是从焦磷酸测序的原理上发展起来的，目前较为成熟的应用平台主要有lonTorrent、Illumina和Complete Genomics(CG)的各种型号。
高通量测序的特点
高通量测序技术的特点之一是操作步骤多、程序复杂，既包括实验室内的标本预处理、核酸提取及其片段化(基因组检测时)、建库、扩增、靶序列富集、混样(pooling)、测序前准备及测序，即湿桌实验过程(wet bench process)；也包括测序后的数据质量分析、比对、变异识别、注释和结果报告与解释等生物信息学分析流程(bioinformatics pipeline)，即干桌实验过程(dry bench process)。上述任一环节出现间题，均会影响检测结果的准确性，进而影响临床决策。
假阳性和假阴性
如何避免假阳性结果是所有高灵敏检测方法需要高度关注的问题。严格有序的实验室各功能区的物理分隔及持续的通风换气是避免因“基因或核酸”气溶胶导致实验室和标本间交叉污染的前提硬件条件；在日常工作中，严格遵循各功能区物品专用、各功能区域的单一工作流向、及时的实验室清洁，以及生物信息学分析流程中适当的数据库和滤过策略的使用等，是防止假阳性的软件要素。
假阴性结果通常容易被忽视，但在精准医学尤其是精准肿瘤学的临床实践中，假阴性结果与假阳性结果对临床疾病诊疗决策具有同等的危害性。临床标本的采集、运送和保存过程中处理不当，核酸提取过程中靶核酸的丢失和提取试剂中可抑制后续检测过程(如扩增)的试剂(如有机溶剂)残留，因仪器设备维护和校准不到位所致的加样不准、光路不正、温度不均一等，均有可能造成假阴性结果。因此，涉及上述各个关键环节的。
发展历程
1977年Sanger和Gilbert分别提出双脱氧链终止法(dideoxy chain-termination method/ Sanger sequencing) 和化学降解发(chemical degradation method/Maxam-Gilbert mehtod) ,标志着第一代测序技术的诞生。由于对核酸测序技术做出的重大贡献，Sanger和Gilbert，以及发现DNA重组技术的Berg分享了1980年的诺贝尔化学奖。此后，随着研究工作的日益深入，自动化测序、焦磷酸测序、高通量测序、甲基化修饰测序等技术应运而生。
2005~2007年，以基于边合成边测序原理的Roche公司的454技术和Illumina公司的Solexa技术，以及基于边连接边测序原理的Life Technologies公司的SOLiD技术为标志的第二代高通量测序技术诞生，测序的规模化进程有了突破性的进展。尽管高通量测序技术很大程度上增加了测序通量、降低了测序成本，并且极大地推进了相关研究的进展，但是模板扩增和序列读长(即读段长度，指在单次测序反应中产生的碱基数)短始终是其难以克服的技术瓶颈。
2008年至今，随着物理、化学、材料和生命科学的不断发展和融合，以单分子测序和长读长为标志的第三代测序技术应运而生。第三代测序技术读长可达上百kb，无须PCR扩增即可实现对DNA分子的实时检测。
文字整理自：《高通量测序技术》(李金明)
资源分享
转发本公众号任意一篇内容至朋友圈，截图发给一只羊，并备注高通量测序技术pdf即可，将在当天统一回复。
仅供学习使用！！
🔗单细胞测序 、🔗scRNA-seq高级分析、🔗scATAC-seq、 🔗R包开发、🔗源码拆解、 🔗测试、🔗RNA-seq 、🔗其它生信分析、 🔗R语言 、🔗Python 、🔗环境配置 、🔗文献分享 、 🔗一只羊的碎碎念
分享内容：分子标记开发及种质资源鉴定、单细胞多组学数据分析、生信编程、算法原理、文献分享与复现等...
点个赞再走！
