试验分组
18头商业化杂交仔猪，3周龄，无支原体、PRRSV和PCV2抗原，PCV2特异性抗体阴性或假阳性，根据体重和ELISA滴度分为三组(每组6头猪)，第二天接种疫苗(图1)。两组接种2dVac (rQIA244 + 10%卡波姆)和2aVac(商品化PCV2a基因型疫苗)，另一组为noVac组(未接种)。所有组在6周龄时用PCV2d (QIA244基因型)和PRRSV-1(欧洲型)联合攻毒，并在攻毒后21天(dpc)安乐死。![]()
图1实验设计。18头仔猪随机分为2dVac组(n = 6)、2aVac组(n = 6)和noVac组(n = 6)，接种时间为- 21天，攻毒时间为0天，安乐死时间为21天。所有仔猪均被PCV2和PRRSV双重攻毒。在整个实验过程中，样品采集和数据分析均按照实验室标准操作程序(SOP)进行。
结果
商业PCV2a疫苗对PCV2毒株的中和作用
目前几乎所有可获得的商业疫苗都是基于pcv2a的。在这项研究中，使用了三种基于PCV2a的商业疫苗(疫苗A、B和C)的抗血清来研究一个PCV2a、一个PCV2b和三个PCV2d野外分离株的中和能力。交叉中和首先用病毒神经化试验（VNT90）测定三种基于PCV2a的疫苗(A、B和C)抗QIA215的中和抗体滴度，QIA215代表同源PCV2a基因型。A疫苗的VNT90滴度分别为256、256和512 (n = 3);B疫苗为128、128和256 (n = 3);随后，利用每种疫苗的VNT90滴度对PCV2a (QIA215)、PCV2b (QIA418)和3株PCV2d分离株(QIA244、QIA126和QIA169)进行中和(图3)。结果表明，疫苗A、B和C对QIA215和QIA418的中和效率均在95%以上，但三种PCV2d毒株的中和效果不同。这三种基于pcv2a的疫苗可中和高达33.7%的PCV2d-1 QIA244和高达60%的PCV2d-2 QIA126。相比之下，来自PCV2d-3亚群的QIA169显示出93.4 - 95.7%的病毒中和率(VN)。![]()
图3三种基于pcv2a疫苗的病毒中和（VN）。采用猪抗血清检测PCV2a (QIA215)、PCV2b (QIA418)、PCV2d-1 (QIA244)、PCV2d-2 (QIA126)和PCV2d-3 (QIA169)。猪接种基于pcv2a的商业疫苗(疫苗A、B和C)。交叉中和用%VN表示(平均值±SE)。
PCV2d-VLPs对PCV2毒株的交叉中和作用
为了评估来自三个亚组的PCV2d-VLPs抗血清的交叉中和作用，利用BES制备了QIA244 (rQIA244)、QIA126 (rQIA126)和QIA169 (rQIA169)的VLPs(图4a)，并用于免疫豚鼠。首先，用rQIA244、rQIA126或rQIA169免疫豚鼠，用VNT90检测抗同源病毒的血清NA滴度。抗rQIA244血清VNT90滴度分别为1024、2048和4098 (n = 3);抗rQIA126血清为2048、2048、8192 (n = 3);抗rQIA169血清分别为1024、8192和8192 (n = 3)。随后，对5株PCV2病毒进行中和。结果显示，抗rQIA244血清对所有PCV2野毒株的有效中和率为90%(图4b)。在抗rQIA126血清中，除QIA244(平均73.8%)外，有4个毒株的中和率为90%(图4c)。抗rQIA169血清对QIA215和QIA418的中和率为99%，而对QIA244和QIA126的中和率分别为43.9%和47%(图4d)。![]()
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图4 PCV2d VLPs的产生及豚鼠PCV2d抗血清交叉中和的评价。rQIA244、rQIA126和rQIA169由杆状病毒表达系统产生(a)。用rQIA244 (b)、rQIA126 (c)和rQIA169 (d)免疫的抗血清对PCV2a (QIA215)、PCV2b (QIA418)和PCV2d (QIA244、QIA126、QIA169和QIA416)毒株进行中和。
PCV2a和PCV2d疫苗在体内的保护效果
根据三种商业疫苗（疫苗A、B、C）和PCV2d-VLPs的体外中和数据，选择rQIA244作为实验疫苗。我们评价了rQIA244（2dVac）对属于PCV2d-1亚组的QIA244毒株的体内保护效果（图1）。将2dVac与市售的PCV2a疫苗（2aVac）的保护效果进行了比较。疫苗对PCV2d攻毒的有效性评价
在猪身上研究了2dVac和2aVac对PCV2d和PRRSV双重攻击的保护作用。2dVac、2aVac和noVac组21 dpc未观察到直肠发热、腹泻、精神沉郁或毛糙等临床症状。7 ~ 21dpc时，2aVac组和noVac组的体重略低于2dVac组。同样，2aVac组(0.44±0.16 kg/day)和noVac组(0.50±0.21 kg/day)的ADWG略低于2dVac组(0.67±0.13 kg/day)(图5a)。然而，不同组之间没有显著差异。在感染病毒后，2dVac和2aVac组未检测到病毒血症或病毒血症极低，而noVac组在14 dpc(34.3±44.2拷贝)和21 dpc(244±212拷贝)时病毒血症显著增加(p < 0.05)(图5b)。2dVac组21 dpc时，在肺(0.07±0.04拷贝)、扁桃体(0.03±0.01拷贝)、肠系膜淋巴结(7.3±3.8拷贝)和腹股沟淋巴结(0.02±0.01拷贝)中检测到PCV2基因组。2aVac组PCV2基因组拷贝数略高(肺3.3±1.3拷贝，扁桃体5.8±1.8拷贝，肠系膜淋巴结1017±377拷贝，腹股沟淋巴结 7.0±2.9拷贝)，但无统计学意义。noVac组PCV2基因组水平明显高于其他组(肺73±33，扁桃体272±130，肠系膜淋巴结 18815±7048，腹股沟淋巴结165±64)(图5c-f)。2dVac组(0.0±0.0,1.0±0.0)和2aVac组(1.0±0.7,1.0±0.0)肺、腹股沟淋巴结宏观病变数明显低于noVac组(2.0±0.5,1.7±0.5)(p < 0.05)。2dVac组肺、扁桃体、肠系膜淋巴结镜下病变未评分，仅在腹股沟淋巴结微可见(0.3±0.2)(图5g)。2dVac组(0.0±0.0)与2aVac组(1.0±0.2)肺部病变评分差异有统计学意义(p<0.05)，以间质性肺炎为主;然而，其他组织的评分在两组之间没有显著差异。同时，2dVac组和2aVac组4个组织的评分均显著低于noVac组(2.0±0.3、1.8±0.2、1.8±0.2、1.8±0.2)，差异均有统计学意义(p< 0.05)。在组织病理学分析中，2aVac和noVac组主要观察到肺部轻度或中度支气管周围淋巴细胞再生，扁桃体和两个淋巴结中淋巴细胞损失和巨噬细胞增殖(图5h)。![]()
图5 2dVac和2aVac的体内保护作用评价。攻毒后21天平均日增重(ADWG,公斤/天)评估(a)。2dVac,2aVac和noVac组血液中PCV2的拷贝数定量(b)。肺(c),扁桃体(d),肠系膜淋巴结(e)和腹股沟淋巴结(f)的PCV2病毒载量。肺部组织病理学病变评分(g)。2dVac,2aVac和noVac组织染色(h)，病变评估：正常(-),轻微的(+),中等(+ +),和严重(+++)。
2dVac和2aVac对PCV2病毒的中和抗体效价
评价2dVac,2aVac和noVac组血清对PCV2不同毒株的交叉中和能力(图6)。2dVac组对QIA215, QIA418, QIA169, QIA244(4779±1672、3755±836、2219±1007和661±698)的中和抗体滴度显著高于2aVac(512±314、614±388、819±280和16±9.8)和noVac(768±755、1088±1052、85±33和8.0±0.0)(p < 0.05)。然而，2aVac和noVac组对任何PCV2毒株的中和抗体滴度均无显著差异。![]()
图6 2dVac, 2aVac和noVac抗血清在0 dpc时的病毒中和试验。采用2dVac、2aVac和noVac抗血清检测QIA215-PCV2a (a)， QIA418-PCV2b (b)，QIA169-PCV2d(c)和QIA244-PCV2d(d)的中和抗体滴度。*、**、***表示差异有统计学意义(p < 0.05、p < 0.01、p < 0.001)。
文章来源：
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翻译：王圣伟；编辑：王瑞爱
