母源性中和抗体对蓝耳疫苗免疫效果有影响吗？

民生 2024-09-02 19:30 山东

摘要

改良活疫苗(MLV)通常用于减少猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的影响，但在田间条件下取得的效果有限。在这里，我们评估了母源性中和抗体(MDNAs)对PRRSV感染后疫苗效力的影响。来自商品猪群的低(A-)或高(A+) MDNA水平的仔猪在3周龄(woa)时接种(V+)或不接种(V-) PRRSV-1 MLV疫苗。由于疫苗接种后(pv)A-V+仔猪的疫苗检出率出乎意料地低，所有V+仔猪在4周龄时进行二次疫苗接种。首免后5周，仔猪进行PRRSV-1野毒株攻毒，以评估疫苗的保护作用，24 h后与免疫状态相似的未攻毒仔猪混合，以评估病毒传播。免疫后2周，A-V+和A+V+仔猪中分别有69%和6%的检测到疫苗毒株，免疫后5周，A-V+和A+V+仔猪中分别有50%和25%的检测到疫苗毒株。免疫后5周，94%的A-V+仔猪和44%的A+V+仔猪血清转阳，只有A-V+组诱导了显著的IFNg应答。攻毒后，与未免疫组相比，A-V+仔猪感染后10天的病毒血症降低了100倍，而A+V+仔猪的病毒血症没有显著降低。我们发现，在攻毒仔猪和接触仔猪中，MDNAs可能通过减弱疫苗复制来削弱疫苗的效力。这些新数据可以帮助改进疫苗接种方案。

试验设计

试验选用56头（大白*长白）*皮特兰仔猪，该猪场为自繁自养场，PRRSV阳性，但对母猪进行PRRS-1 MLV疫苗接种，以便对PRRSV保持一定水平的免疫力。在研究开始之前，分别在育肥期结束时取样采用ELISA检测、对断奶仔猪进行PCR检测PRRSV状态。本研究使用的仔猪由4头高PRRSV中和抗体（NA）滴度母猪和5头低PRRSV NA滴度母猪所生。在1周龄时，采集仔猪血液，根据其PRRSV特异性MDNA水平进行分配:A+(高水平，平均NA滴度201±73)和A-(低水平，平均NA滴度10±5)。在3周龄时，试验仔猪断奶，转移到生物安全3级设施，根据A+/A-状态、体重和性别随机分配(图1;每组8头仔猪)。采用RT-PCR检测仔猪3周龄时PRRSV感染情况。3周龄后分别测定MDA的衰减(A+:平均NA滴度10±5;A-:不再检测到NA)。仔猪在3和4 周龄分别接种(V+)或不接种(V-) PRRS疫苗，采用0.6 * 25 mm针头注射器颈部肌肉注射。在第一次接种后5周，一半仔猪采用无针注射器(每鼻孔2.5 mL)鼻腔接种5*10⁵ TCID50/头PRRSV-1 Finistere株。次日，将免疫状态相同的未攻毒(C)仔猪与攻毒(I)仔猪在同一栏内混合(2头C仔猪和2头I仔猪按栏混合)。8头未接种未攻毒仔猪(4只A+和4只A-)作为对照组。由于MDNA的衰减，在PRRSV攻毒时，未检测到V-组和对照组的A+仔猪的PRRSV抗体。

每周颈静脉采血1次，连续5周，单独检测病毒血症，监测体液和细胞免疫反应。攻毒后，每天记录临床症状，每周采集两次血液，直到接种后第42天(D42 pi)将动物安乐死，以单独测定Finistere株病毒血症并评估免疫反应。

图1实验方案及时间表

结果

MDNAs降低了接种仔猪的PRRS免疫效果

在W1 pv时，16只A-V+仔猪中只有2只检测到疫苗毒株(图2A)。因此，在与第一次相同的条件下，在W1 pv时进行了第二次疫苗接种。在W2 pv时，A-V+组16头仔猪中有11头(69%)出现病毒血症，而A+V+组16头仔猪中只有1头(6%)出现病毒血症。A+V+和A-V+之间的差异一直保持到W5 pv, A-V+组的病毒血症仔猪数量是A+V+组仔猪的两倍(图2A)。A-V+仔猪在W3 pv和W5 pv时观察到显著的IFNg应答，而对于A+V+组，IFNg-SCs的数量仅在W3 pv时显著增加(图2B)。在血清转阳方面，除1头A-V+仔猪外，其余仔猪在W5 pv时血清均可检测到PRRSV抗体(图2D)，而16头A+V+仔猪中只有7头血清呈阳性(图2C)。

图2接种后的数据

MDNAs降低了PRRS疫苗在攻毒仔猪中的效力

PRRSV攻毒后，观察到非常轻微的临床症状。未接种疫苗(V-I)的仔猪在攻毒后3、8和9 d的直肠温度显著高于未接种疫苗的对照组仔猪，但生长性能无统计学差异。在接种疫苗的猪中，攻毒后，无论其MDNA状态(A+V+I和A-V+I)如何，直肠温度和生长性能与V-I组没有显著差异。

A-V+I仔猪Finistere病毒载量低于V-I仔猪，在攻毒后10天病毒载量降低100倍(p = 0.019)(图3A)。在A+V+I组和V-I组之间，或接种疫苗组之间，没有观察到差异。病毒血症的平均持续时间从V-I组的21±6天、A+V+I组的21±7天缩短至A-V+I组的16±9天，但差异不显著。

在A-V+组和A+V+组中，接种疫苗可诱导仔猪在攻毒后7天产生对Finistere毒株的早期IFNg应答(图3B)。虽然与A+V+I仔猪相比，A-V+I仔猪中检测到更多的IFNg-SCs，但差异不显著。有趣的是，在攻毒后7-15天，血清中IFNg-SC的数量与Finistere病毒载量之间呈负相关(r =-0.55;P < 0.05)。攻毒猪在攻毒后30天检测到NAs。在攻毒后42天，8头A-V+I仔猪中有6头具有可量化的NAs滴度(>10)，而8头A+V+I仔猪中有3头、8头V-I仔猪中有1头具有可量化的NAs滴度。

图3攻毒后数据

MDNAs对PRRSV传播的影响

与V-C仔猪相比，A-V+ C接触猪的病毒血症降低，但在A+V+C仔猪中没有(图3C)。在攻毒后7天，A-V+C仔猪中尚未检测到Finistere毒株，而在其他接触组中，在攻毒后4天发现了第一例阳性仔猪(图3D)。A-V+C组的平均病毒血症持续时间缩短至6±3天，而A+V+C组和V - C组分别为12±6天和19±6天。在所有未接种疫苗的仔猪中检测到Finistere毒株，在接种疫苗的组中，除了一头A+V+C猪外，所有接触动物都被感染(图3D)。

结论

我们的研究结果证实，MDNAs影响PRRS疫苗株的复制和疫苗接种后的免疫反应，导致疫苗效力下降。在低MDNAs情况下，免疫蓝耳苗可以在野毒感染后加快中和抗体产生、降低病毒载量、缩短病毒血症时间。最后，观察到的PRRS疫苗接种效果低可能是内源性(MDAs)和外源性(病毒感染)因素共同作用的结果。

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