摘要
本实验研究的目的是评价含有猪圆环病毒2a/b型(PCV2a/b)和肺炎支原体的新型三价疫苗的有效性。根据制造商的建议，猪在3和24日龄时肌肉注射1.0 mL疫苗，或在21日龄时肌肉注射2.0 mL疫苗。在42日龄时用PCV2d(鼻内途径)或肺炎支原体(气管内途径)或两者同时攻毒。基于临床(生长性能)、免疫学(保护性免疫)、微生物学(病毒血症和喉部拭子)和病理学(肺和淋巴病变)结果，单剂量和双剂量实验之间没有统计学差异。在两个剂量试验中，接种/攻毒组和未接种/未攻毒组猪的生长性能与未接种/攻毒组猪相比均有显著差异。与未接种疫苗/攻毒的猪相比，接种疫苗的猪在攻毒后产生了pcv2d特异性中和抗体、干扰素γ分泌细胞(IFN-γ- sc)以及肺炎支原体特异性IFN-γ- sc。与未接种疫苗/攻毒的猪相比，接种疫苗/攻毒降低了血液中PCV2d的病毒载量，降低了喉拭子中肺炎支原体的载量，同时降低了肺部和淋巴病变的严重程度。三价疫苗接种对PCV2d单一感染、肺炎支原体单一感染和PCV2d/支原体混合感染具有良好的保护作用。试验设计
表1猪圆环病毒2d型(PCV2d)和肺炎支原体(Mhp)的接种和攻毒试验设计
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将35头猪分为7组(每组5头，公2头，母3头)，每组进行单剂量和双剂量试验。单剂量试验每组5头猪，分为Vac1/ChPM、UnVac1/ChPM、Vac1/ChP、UnVac/ ChP、Vac1/ChM、UnVac1/ChM、UnVac1/ChM和UnVac1/UnCh组。双剂量试验每组5头猪，分别为:Vac2/ChPM、UnVac2/ChPM、Vac2/ChP、UnVac2/ChP、Vac2/ChM、UnVac2/ChM和UnVac2/UnCh组(表1)。在-39、-18、0、7、14和21 dpc（攻毒后天数）采集所有猪的血液和喉拭子。单剂量试验组猪在-21 dpc（接种当天）也采血。每天对猪进行监测，每周对临床症状进行评分。简单地说，评分定义如下:0(正常)，1(毛糙)，2(毛糙和呼吸困难)，4(严重呼吸困难和腹式呼吸)，6(死亡)。结果
血液中PCV2d基因组拷贝数减少
在PCV2d攻毒时，没有在任何猪身上检测到PCV2d的基因组拷贝。在整个实验过程中，阴性对照组(UnVac1/UnCh和UnVac2/UnCh)未检测到PCV2d的基因组拷贝。单剂量实验结果显示，与未免疫攻毒组(UnVac1/ChPM和UnVac1/ChP)相比，免疫攻毒组(Vac1/ChPM和Vac1/ChP)在7、14和21 dpc时血液中PCV2d基因组拷贝量显著降低(P < 0.05)(图1A)。双剂量实验结果显示，与未免疫攻毒组(UnVac2/ChPM和UnVac2/ChP)相比，免疫攻毒组(Vac2/ChPM和UnVac2/ChP)在7、14和21 dpc时血液中PCV2d基因组拷贝量显著降低(P < 0.05)(图1C)。![]()
图1单剂量实验(A和B)和双剂量实验(C和D)各组血清PCV2d和喉部肺炎支原体基因组拷贝数的平均值，不同上标(a、b、c)表示各试验组间差异显著(P < 0.05)。
喉拭子中肺炎支原体基因组拷贝减少
在猪肺炎支原体攻毒时，没有在任何猪身上检测到猪肺炎支原体的基因组拷贝。在整个实验过程中，阴性对照组(UnVac1/UnCh和UnVac2/UnCh)未检测到肺炎支原体基因组拷贝。单剂量实验在7、14和21 dpc时，与未免疫攻毒组(UnVac1/ChPM和UnVac1/ChM)相比，免疫攻毒组(Vac1/ChPM和Vac1/ChM)喉拭子中肺炎支原体基因组拷贝量显著降低(P < 0.05)(图1B)。双剂量实验结果显示，与未免疫攻毒组(UnVac2/ChPM和UnVac2/ChM)相比，免疫攻毒组(Vac2/ChPM和UnVac2/ChM)喉拭子在7、14和21 dpc时的肺炎支原体基因组拷贝量显著降低(P < 0.05)(图1D)。三价疫苗诱导的PCV2d免疫应答
首次接种时各组未检测到PCV2 ELISA滴度、PCV2d特异性中和抗体和PCV2d特异性IFN-γ-SC。在整个实验过程中，阴性对照组(UnVac1/UnCh和UnVac2/UnCh)均未检测到PCV2 ELISA滴度、PCV2d特异性中和抗体和PCV2d特异性IFN-γ-SC。在单剂量实验中，免疫攻毒组(Vac1/ChPM和Vac1/ChP)的PCV2 ELISA(图2A)和PCV2d特异性中和抗体滴度(图2B)在0 dpc时显著高于未免疫攻毒组(UnVac1/ChPM和UnVac1/ChP) (P < 0.05)。这些统计差异在研究结束前都很明显。免疫攻毒组(Vac1/ChPM和Vac1/ChP)的PCV2d特异性IFN-γ-SC水平在0、14和21 dpc时显著高于未免疫攻毒组(UnVac1/ChPM和UnVac1/ChP)(图2C)。在双剂量实验中，免疫攻毒组(Vac2/ChPM和Vac2/ChP)的PCV2 ELISA(图2D)和PCV2d特异性中和抗体滴度(图2F)在-18、0、14和21 dpc时显著高于未免疫攻毒组(UnVac2/ChPM和UnVac2/ChP)。免疫攻毒组(Vac2/ChPM和Vac2/ChP)的PCV2d特异性IFN-γ-SC水平在-18、0、14和21 dpc时显著高于未免疫攻毒组(UnVac2/ChPM和UnVac2/ChP)(图2G)。![]()
图2单剂量实验组(A、B、C)和双剂量实验组(D、E、F)PCV2 ELISA血清抗体水平、PCV2d中和抗体(NA)滴度和外周血单核细胞(PBMC) PCV2特异性干扰素γ分泌细胞(IFN-γ- sc)的出现次数，不同上标(a、b、c、d)表示各试验组间差异显著(P < 0.05)。
三价疫苗诱导的肺炎支原体免疫应答
首次接种时各组未检测到肺炎支原体ELISA S/P值和肺炎支原体特异性IFN-γ-SC。在整个实验过程中，阴性对照组(UnVac1/UnCh和UnVac2/UnCh)未检测到猪肺炎支原体ELISA S/P值和猪肺炎支原体特异性IFN-γ-SC。单剂量实验结果显示，免疫攻毒组(Vac1/ChPM和Vac1/ChM)在0、14和21 dpc时，猪肺炎支原体ELISA S/P值(图3A)和猪肺炎支原体特异性IFN-γ-SC水平(图3B)显著高于未免疫攻毒组(UnVac1/ChPM和UnVac1/ChM)(P < 0.05)。双剂量实验结果显示，免疫攻毒组(Vac2/ChPM和Vac2/ChM)在0、14和21 dpc时猪肺炎支原体ELISA S/P值(图3C)和猪肺炎支原体特异性IFN-γ-SC水平(图3D)显著高于未免疫攻毒组(UnVac2/ChPM和UnVac2/ChM)(P < 0.05)。![]()
图3单剂量实验组(A、B)和双剂量实验组(C、D)肺炎支原体特异性ELISA血清抗体水平和外周血单核细胞(PBMC)肺炎支原体特异性干扰素γ分泌细胞(IFN-γ- sc)的出现次数，不同上标(a、b、c)表示各试验组间差异显著(P < 0.05)。
降低肺和淋巴病变的严重程度
在单剂量试验中，与未免疫攻毒组(UnVac1/ChPM和UnVac1/ChP)相比，免疫攻毒组（Vac1/ChPM和Vac1/ChP）淋巴病变严重程度和PCV2阳性抗原数量显著降低(P < 0.05)。与未免疫攻毒组(UnVac1/ChPM和UnVac1/ChM)相比，免疫攻毒组的猪(Vac1/ChPM和Vac1/ChM)在21 dpc时的宏观和微观肺病变显著降低(P < 0.05)(表3)。在双剂量试验中，与未免疫攻毒组(UnVac2/ChPM和UnVac2/ChP)相比，免疫攻毒组(Vac2/ChPM和Vac2/ChP)在21 dpc时淋巴病变数量和淋巴PCV2阳性抗原数量显著降低(P < 0.05)。与未免疫攻毒组(UnVac2/ChPM和UnVac2/ChM)相比，免疫攻毒组的猪（Vac2/ChPM和Vac2/ChM）在21 dpc时的宏观和微观肺部病变显著减少(P < 0.05)(表3)。阴性对照组(UnVac1/UnCh和UnVac2/UnCh)在整个实验过程中观察到极少量的宏观肺病变。在整个实验过程中，阴性对照组(UnVac1/UnCh和UnVac2/UnCh)均未观察到肺和淋巴组织的显微镜病变。表3攻毒后21天各组病理结果
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单剂量与双剂量试验效果无差异
单剂量组和双剂量组在临床评分、ADWG(表2)、PCV2d病毒血症水平、喉部肺炎支原体水平、宏观肺病变(表3)、微观肺和淋巴病变(表3)、PCV2抗原数量(表3)等方面均无统计学差异。![]()
