摘要
气管样本合并检测肺炎支原体DNA可以降低诊断成本，本研究的目的是评估样本合并检测的敏感性，并研究3、5和10倍合并气管样本中猪肺炎支原体检出率。将48份猪肺炎支原体PCR阳性的田间样本与猪肺炎支原体DNA阴性的田间样本进行3倍、5倍和10倍混合，并进行3次重复检测。3倍混合灵敏度估计为0.96(95%置信区间: 0.93, 0.98)， 5倍混合灵敏度估计为0.95(95%置信区间: 0.92, 0.98)，10倍混合灵敏度估计为0.93(95%置信区间: 0.89, 0.96)。如果单个气管样本Ct值< 33，则基本所有混合样本均为PCR阳性。所以，气管样本合并检测可以成为一种经济有效的工具，以最大限度地提高猪肺炎支原体监测计划的性能。
试验设计
图1聚合酶链反应(PCR)检测混合样本肺炎支原体DNA研究设计。单个肺炎支原体阳性气管样本([Mhp(+)];[n=48])和肺炎支原体阴性气管样本(Mhp(−))中按3、5和10倍混合，并按3个重复进行检测(R1、R2和R3分别代表重复1、2和3)。
结果
检测敏感性
2份(2/50)初始Ct值较高(36.6和36.8)的气管样本重新检测后肺炎支原体PCR阴性，排除分析。共使用432个混合样本进行灵敏度评估，其中403个混合样本肺炎支原体PCR阳性。3倍混合144份气管样本中有137份阳性(95.1%)，5倍混合144份气管样本中有136份阳性(94.4%)，10倍混合144份气管样本中有130份阳性(90.3%)。3倍混合灵敏度估计为0.96(95%置信区间: 0.93, 0.98)， 5倍混合灵敏度估计为0.95(95%置信区间: 0.92, 0.98)，10倍混合灵敏度估计为0.93(95%置信区间: 0.89, 0.96)。
个体Ct值和合并样本数对混合样本Ct值的影响
48份PCR阳性个体样本的Ct值为25.3 ~ 35.9。除了一个样本外(图2)，如果单个气管样本Ct值< 33，则所有混合样本均为PCR阳性。无论个体样本的初始Ct值如何，Ct值都会随着混合倍数的增加而增加(p < 0.0001)。合并气管样本与阳性个体样本Ct值差异见表1。此外，当初始Ct值较低时，混合样品中Ct值变化的幅度在数值上更高。
图2 混合气管样本中肺炎支原体PCR Ct值的变化，红色阴影区域代表PCR检测为肺炎支原体阴性(PCR Ct>37
表1 48个个体和432个合并气管样本的肺炎支原体DNA检测PCR Ct值。不同字母(按顺序为a-d)表示p≤0.05的统计学差异
文章来源：
翻译：王圣伟； 编辑：王瑞爱
