10月29日，CDE重磅发布了《可复制型慢病毒检测共性问题与技术要求》，对于CGT 领域如何检测可复制型慢病毒 (RCL) 做出了进一步规范。
近年来，随着慢病毒载体技术在生物制药领域得到广泛应用，所介导的基因靶细胞范围也逐步增加，除了传统的T细胞，NK细胞和多种干细胞也进入了各位科学家视野，为适应目前不同阶段产品管线中应用场景下的慢病毒载体治疗产品的质量控制，该技术要求文件通过样品的性质、样品量、检测检测方法及方法学验证等维度对RCL检测进行了技术规范和细节要求说明。
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RCL检测样品要求
表1 RCL检测样品要求汇总
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RCL检测方法
1. 指示细胞共培养法检测要求
1.1 细胞共培养法
将病毒载体上清液和生产终末细胞与允许细胞系 (如 C8166细胞) 共培养并至少进行5次传代，以扩增任何潜在的RCL；在扩增培养结束后对共培养物进行离心处理，将收集的上清液再次与C8166细胞进行共培养作为指示期，并收集指示期的样品进行RCL的检测。
如果在扩增阶段有充分数据证明连续传代培养可以去除残留的蛋白 (如 P24蛋白) 和质粒残留导致的假阳性风险，或终点检测方法不受质粒及蛋白残留的影响，或者在扩增阶段样品组可以观察到细胞病变，则可不进行指示期。
1.2 实验组设置
共培养阶段需设置合理的培养对照，阴性对照，阳性对照，抑制对照等，设置抑制对照是为了证明检测样品对阳性病毒的检出无影响。
1.3 阳性对照病毒选择
目前尚未有充分证据表明RCL与VSV-G包膜蛋白的HIV具有相似的生长特性和理化特性，建议选择满足RCL验证灵敏度要求的野生型HIV, 减毒HIV或重组的条件复制型慢病毒载体作为阳性对照，应确保阳性对照的代表性。
1.4 共培养细胞需要提供全面的研究资料
共培养的细胞应按照《中国药典》检定用细胞相关要求提供全面的研究资料，如合法来源证明性文件，细胞库建库过程资料，细胞库检定研究资料等。
2. 终点检测方法选择
采用至少两种不同原理的终点检测方法进行RCL检测，常见的终点检测方法包括序列检测 (如 psi-gag、VSV-G)、逆转录酶活性检测 (PERT)、功能蛋白检测 (如 p24蛋白) 等。
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RCL检测方法学验证要求
RCL检测分为共培养和终点检测两个实验阶段，验证也应当考虑两个阶段的验证，根据ICH Q2需考量的验证参数汇总如表2：
表2 方法学验证参数考量
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博瑞策生物RCL检测方案
我们提供经验证的HIV-1阳性对照，有清晰来源证明，并经过建库检定及稳定性研究，完全匹配文件要求的灵敏度及验证要求。
博瑞策生物提供的RCL终点检测法，包括经过验证的关键基因检测 (qPCR)、P24检测 (ELISA)、逆转录酶活检测 (QPERT)，位于上海的GMP检测中心为分子生物学实验设置了独立区域，并将阴性区、阳性区、准备区进行分隔，避免气溶胶污染导致的假阳性情况。我们可提供多种终点检测方法的组合，用于对结果的判读。
博瑞策生物提供的RCL检测方案高度契合CDE官方要求，前瞻性技术开发视野助力您的生物安全检测更加可靠！
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图片来源：CDE官方文件
关于博瑞策生物
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上海GMP检测中心：提供GMP级生物安全检测。其符合GMP和国际质量标准的分子、免疫、微生物、病毒和细胞检测平台，已成功支持了疫苗、mRNA、抗体以及细胞基因治疗产品的国内外IND/BLA申报。 苏州GLP检测中心：提供GLP级病毒清除验证服务和CNAS动物实验服务，并具备电镜等配套实验平台。已成功支持近百项国内外申报项目，已顺利通过欧盟GMP/GLP QP审计。
