活性氧（Reactive Oxygen Species，简称ROS）是指在生物体内与氧代谢有关的、含氧自由基和易形成自由基的过氧化物的总称，包括超氧自由基阴离子（O2•−）、过氧化氢（H2O2）、羟自由基（OH•）等
一、活性氧在细胞信号传导中具体是如何发挥作用的？
二、ROS实验步骤
常用的荧光染料是DCFH-DA（2,7-二氯荧光素二乙酸酯），它能够进入细胞并在细胞内被酯酶水解成DCFH。DCFH随后可以被细胞内的活性氧氧化，生成发荧光的DCF。DCFH-DA本身没有荧光，但可以自由穿过细胞膜，一旦进入细胞，它会被细胞内的酯酶水解成DCFH，由于DCFH无法穿过细胞膜，因此荧光探针会在细胞内积聚。细胞内的ROS能够氧化无荧光的DCFH，生成有荧光的DCF，且荧光强度与ROS水平成正比。
将收集完单细胞悬液以500g离心5min，弃上清。
用2mL PBS重悬细胞洗涤一次，500g离心5min弃上清。
按照1:1000用PBS稀释 DCFH-DA探针，使终浓度为 10μmol/L，即1mL PBS中加入1μL ROS探针。
加入稀释好的DCFH-DA 1mL重悬细胞， 37℃避光孵育30 min。
用2ml PBS 500g离心5min洗涤细胞1次，以充分去除未进入细胞内的 DCFH-DA。
加入200uL PBS重悬，上机检测。
注意事项：
用此方法检测活性氧的细胞注意不要携带绿色荧光标签。
使用已知能增加ROS产生的化合物作为阳性对照，以验证实验条件是否有效。
建议选用胰酶消化，消化时间必须严格控制，及时终止消化，消化时间太久，容易对细胞造成损伤和死亡。
三、实验结果解读
可以看出实验组与对照组相比，荧光强度明显增加，第一行图片是通过荧光拍照对比荧光强度；第二行图片是通过流式峰图对比荧光强度，通常关注荧光强度的变化，这可以通过Mean（平均值）、Geomean（几何平均值）或% Gated（被门阈值包含的细胞百分比）等参数来表示。
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