线虫氧化应激实验protocol

学术   2024-09-18 12:08   吉林  

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年轻和衰老线虫对氧化还原刺激的反应(齐一生物)

一、实验名称:线虫氧化应激实验

二、实验目的:探究XX对秀丽隐杆线虫抗氧化作用

三、材料方法:

1仪器耗材

体视显微镜;生化培养箱;恒温培养摇床;立式压力蒸汽灭菌器;

胡桃醌;XX:xx mg/mL;野生型 N2 (Bristol)秀丽隐杆线虫(C.elegans)。

2实验方法

应激实验前准备:

1.固体培养基(nematode growth media,NGM)配制 :称 4.0 g 琼脂、0.5 g 蛋白胨、0.6 g NaCl 加入 100 mL 蒸馏水溶解摇匀,再加入 1 mol/L MgSO4 溶液、1 mol/L CaCl2 溶液各 200 μL,pH6.0 磷酸氢钾缓冲液 3.25 mL, 摇匀后补足蒸馏水至 200 mL。121 ℃ 高压蒸汽灭菌 20 min,温度降至 60 ℃ 左右,加入 200 μL 5 mg/mL 胆固醇乙醇溶液,倒板备用。取 L4 期野生型 N2 线虫于涂布 OP50 的 NGM 培养基内,观察其产卵情况,开始产卵 4 h 后,将 L4 期成虫挑去,将卵培养至 L4 期成虫,该批成虫即为同期化成虫。

2.加药组与对照组NGM的配制:加药组 NGM 配制方法同1,加入XX后,分别配制成梯度 XX 的 NGM 培养基,对照组 NGM 的配制方法同 1,加入与XX等量的蒸馏水,并加入定量的胡桃醌,配制成对照组 NGM 培养基。

应激实验:

应激实验前准备全部完成后,将50条野生型线虫N2转入加药组和对照组中,每隔一小时观察线虫的存活情况。线虫死亡及剔除标准:无运动迹象,用铂丝轻触后 10 s 无反应;线虫因爬出培养皿失踪或致死、虫卵在体内孵化成袋样虫的不计入数据。

四、实验结果

将原始数据进行统计后,应用GraphPad Prism软件进行绘制生存曲线

五、结果分析

本实验构建了 200 μmol/L 胡桃醌氧化应激条件,考察了XX 对野生型 N2 线虫在此条件下的生存时间。实验表明......

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