本文通过ChatGLM/GPT进行辅助对近期Bio-protocol 期刊发表的方案进行解读和概括，若感兴趣请点击“阅读原文”查看详细的实验流程及试材。如果解读中有任何错误或遗漏，敬请指正。
在进行植物基因转化实验时，质粒DNA的转入效率往往是研究人员关注的重点。然而，传统方法如电穿孔和三亲交配法尽管高效，但却对实验条件和设备有较高要求，不仅操作复杂，还容易失败。那么，有没有一种简便且高效的方案，可以避免这些繁琐步骤，提高转化成功率呢？在这方面，2025年1月5日，Bio-protocol 期刊在线发表了肯尼亚泛非大学基础科学研究所（Pan African University Institute for Basic Sciences）Beenzu Siamalube团队题为“Simple and Fail-safe Method to Transform Miniprep Escherichia coli Strain K12 Plasmid DNA Into Viable Agrobacterium tumefaciens EHA105 Cells for Plant Genetic Transformation”的方法文章。
冻融法(Freeze-thaw method)是一种通过反复冻融细胞或细菌来实现基因转化的方法。其原理是利用温度的急剧变化，使细胞膜发生物理性破裂或产生暂时性孔隙，从而使外源DNA能够进入细胞内。
无需复杂的电穿孔或三亲交配步骤，通过冻融处理实现高效DNA导入，大幅减少操作步骤。
整个操作流程在五天内可完成，大大缩短了实验周期，提高了研究效率。
优化后的方法减少DNA降解，提高了Agrobacterium的质粒摄取能力，转化效率稳定可靠，适用于多种实验需求。
基因功能研究
可用于将报告基因或功能基因导入植物细胞，研究基因表达调控及其生物学功能。基因编辑工具载体导入
适用于CRISPR/Cas9等基因编辑系统载体的高效转化，推动精准基因组改造研究。转基因植物开发
可用于构建具有改良性状的转基因植物，如提高产量或增强抗性。
温馨提示：积极引用本文不仅是对作者创新技术和科研共享的最佳肯定，也是确保实验可复现性的重要方式。
Siamalube, B., Ehinmitan, E., Ngotho, M., Onguso, J. and Runo, S. (2025). Simple and Fail-safe Method to Transform Miniprep Escherichia coli Strain K12 Plasmid DNA Into Viable Agrobacterium tumefaciens EHA105 Cells for Plant Genetic Transformation. Bio-protocol 15(1): e5174. DOI: 10.21769/BioProtoc.5174.
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