导言
小bio汇总了过去一年Bio-protocol期刊发表的“干细胞”相关实验方案。这些方案由全球科学家分享，方案内容详实、逐步清晰、容易复现，希望能为您的研究提供帮助与启发。
更多“干细胞”文章请到bio-protocol.org查阅。
干细胞培养与成像技术
● A Full Good Manufacturing Practice–Compliant Protocol for Corneal Stromal Stem Cell Cultivation
符合GMP标准的角膜基质干细胞培养全流程
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5074
作者：Mithun Santra、Yen-Michael S. Hsu、Shaheen Khadem、Sydney Radencic、Martha L. Funderburgh、Onkar B. Sawant、Deepinder K. Dhaliwal、Vishal Jhanji、Gary H.F. Yam
文章亮点：本文开发了一种符合GMP标准的人类角膜基质干细胞（CSSC）分离和扩增方法，为临床级CSSC的生产、移植及治疗角膜瘢痕相关疾病的临床试验奠定了基础。
● Preparing Chamber Slides With Pressed Collagen for Live Imaging Monolayers of Primary Human Intestinal Stem Cells
制备带压制胶原的腔室载玻片用于原代人肠道干细胞单层活细胞成像
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5116
作者：Joseph Burclaff、Scott T. Magness
文章亮点：本文开发了一种3D打印胶原模具，可制备平整均匀的薄胶原层，从而优化了原代人类肠道干细胞的培养与显微成像，解决了胶原厚度对细胞生长和活体成像的限制问题。
● Alternative Method for Obtaining Human-Induced Pluripotent Stem Cell Lines and Three-Dimensional Growth: A Simplified, Passage-Free Approach that Minimizes Labor
获得人诱导多能干细胞系及三维培养的替代方法：一种简化且无需传代的低劳动量方法
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5081
作者：Masaya Tsukamoto、Tomoyuki Kawasaki、Akihiro Umezawa、Hidenori Akutsu
文章亮点：本文开发了一种在三维培养条件下重编程和维持iPSCs的方法，通过使用生物反应器简化工作流程，消除二维培养和酶解步骤的需求，显著降低技术复杂性并提高可扩展性。
● Method for Large-scale Production of hIPSC Spheroids
大规模生产hIPSC球体的方法
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.4965
作者：Lucas Lemarié、Edwin-Joffrey Courtial、Jérôme Sohier
文章亮点：本文开发了一种基于3D打印硅胶模具的低成本、可重复使用的技术，能够在标准6孔板中快速大规模制备高一致性、可控直径的人类诱导多能干细胞球体，为组织工程和基础研究提供了一种便捷的工具。
类器官构建与应用
● Generation of Skeletal Muscle Organoids from Human Pluripotent Stem Cells
从人类多能干细胞生成骨骼肌类器官
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.4984
作者：Urs Kindler、Holm Zaehres、Lampros Mavrommatis
文章亮点：本文建立了一种基于3D骨骼肌类器官的分化系统，可从患者特异性iPSC中长期稳定地培养PAX7阳性的肌源性祖细胞，用于研究健康及疾病条件下的人类肌发生过程和肌肉营养不良的病理机制。
● Generation of Multicellular 3D Liver Organoids From Induced Pluripotent Stem Cells as a Tool for Modelling Liver Diseases
利用诱导多能干细胞生成多细胞三维肝类器官作为肝病模型的工具
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5042
作者：Setjie W. Maepa、Mohlopheni J. Marakalala、Hlumani Ndlovu
文章亮点：本文优化了一种从iPSCs生成包含肝细胞、星状细胞和Kupffer细胞的多细胞3D肝类器官的方法，为研究肝脏疾病模型和相关功能提供了强有力的工具。
● Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cell (hiPSC)-Derived Astrocytes for Amyotrophic Lateral Sclerosis and Other Neurodegenerative Disease Studies
产生人类诱导多能干细胞 (hiPSC) 衍生的星形胶质细胞，用于研究肌萎缩侧索硬化症和其他神经退行性疾病
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.4936
作者：Katarina Stoklund Dittlau、Abinaya Chandrasekaran、Kristine Freude、Ludo Van Den Bosch
文章亮点：本文开发了一种基于小分子诱导的快速高效hiPSC分化方法，能在较短时间内生成成熟的功能性星形胶质细胞，可冷冻保存，适用于ALS研究及其他相关领域。
基因编辑
● Efficient Gene-Editing in Human Pluripotent Stem Cells Through Simplified Assembly of Adeno-Associated Viral (AAV) Donor Templates
通过简化腺相关病毒（AAV）供体模板组装高效编辑人多能干细胞基因
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5097
作者：Berta Marcó de La Cruz、Sanhita Mitra、Bingqing He、Melis Çelik、Debora Kaminski、Erik Smedler、Fredrik H. Sterky
文章亮点：本文开发了一种结合AAV-DJ供体与CRISPR/Cas9核糖核蛋白的灵活高效基因编辑策略，利用Golden Gate克隆和简化的AAV小规模纯化方法，实现了高效率和多功能的hPSC基因编辑。
● Multiplex Genome Editing of Human Pluripotent Stem Cells Using Cpf1
利用Cpf1实现人类多能干细胞的多重基因组编辑
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5108
作者：Haiting Ma
文章亮点：本文开发了一种基于单载体系统的Cpf1基因编辑方法，能够高效实现hPSCs的多位点精确编辑，同时具备低脱靶效应，并支持细胞分化为功能性神经元和β细胞。
● CRISPR/Cas9-Based Protocol for Precise Genome Editing in Induced Pluripotent Stem Cells
基于CRISPR/Cas9的诱导多能干细胞精确基因组编辑方案
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5141
作者：Avinash Singh、Swathy Babu、Marcus Phan、Shauna H. Yuan
文章亮点：本文亮点在于通过结合p53抑制剂和促存活小分子，显著提高CRISPR在iPSCs中基因编辑的效率，实现超过90%的同源重组率，同时优化了细胞存活率并加速了同基因系的构建过程。
免疫调节与疾病治疗
● Mesenchymal Stromal Cell (MSC) Functional Analysis—Macrophage Activation and Polarization Assays
间充质干细胞（MSC）功能分析—巨噬细胞激活与极化测定
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.4957
作者：Hazel Y. Stevens、Angela C. Jimenez、Bryan Wang、Ye Li、Shivaram Selvam、Annie C. Bowles-Welch
文章亮点：本文建立了一种体外共培养体系，用于研究MSC对巨噬细胞活化和极化的调控机制，揭示其免疫调节潜力和在细胞治疗中的应用前景。
● Expansion and Precise CRISPR-Cas9 Gene Repair of Autologous T-Memory Stem Cells from Patients with T-Cell Immunodeficiencies
扩增及精确CRISPR-Cas9基因修复来自T细胞免疫缺陷患者的自体记忆性T干细胞
链接：https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5085
作者：Xun Li、Van Trung Chu、Christine Kocks、Klaus Rajewsky
文章亮点：本文开发了一种基因修复策略，通过从PBMC中扩增并富集T记忆干细胞（TSCM），结合CRISPR-Cas9和rAAV6介导的HDR，成功修复FHL2患者T细胞中的PRF1基因突变，提供了针对遗传性T细胞免疫缺陷的可行治疗方案。
END
往期相关推文（点击可跳转）
Bio-protocol 于2011年在斯坦福大学创建，旨在提高科研的可重复性，以助力科学发现。它与 eLife、Science/AAAS等国际知名出版机构合作，致力于提升实验方案的透明度和共享。Bio-protocol是 Bio-protocol 旗下一份同行评审的国际学术期刊，专注于发表高质量的生命科学实验方案。至今，已发表来自全球两万多名科研工作者的近5000 篇文章。该期刊已被PubMed Central、Web of Science 等国际权威数据库收录,是全球为数不多的拥有影响因子的生物学实验方案期刊之一。Bio-101 是Bio-protocol旗下一个中文生命科学实验方案的共享平台，通过与上百个国内优秀科研团队的合作，已出版了多本同行评审、免费获取的中文实验方案电子书。
