本文通过ChatGLM/GPT进行辅助对近期Bio-protocol 期刊发表的方案进行解读和概括，若感兴趣请点击“阅读原文”查看详细的实验流程及试材。如果解读中有任何错误或遗漏，敬请指正。
在遗传研究中，斑马鱼和青鳉因其遗传操作便捷、发育透明而成为重要的模式生物。然而，传统的骨骼钙化发育研究方法通常依赖于转基因荧光标记鱼，这不仅获取难度高，还需数月时间进行繁育筛选，极大延长了实验周期。在这方面，2024年12月20日，Bio-protocol 期刊在线发表了日本埼玉大学（Saitama University）Akinori Kawamura团队题为“Live Visualization of Calcified Bones in Zebrafish and Medaka Larvae and Juveniles Using Calcein and Alizarin Red S”的方法文章。
钙化骨骼(Calcified bones)是指在骨骼发育过程中通过钙盐沉积而形成的坚硬骨结构。钙化是骨骼生长和发育的关键步骤，其中主要成分是羟基磷灰石（Ca₁₀(PO₄)₆(OH)₂），即一种钙和磷酸盐组成的矿物质。钙化过程通过细胞活动，如成骨细胞的分泌，逐渐将软骨基质转化为坚硬的骨组织。
可在活体斑马鱼和青鳉幼鱼中进行多次染色，且不会影响骨骼结构，便于动态追踪钙化骨骼的发育过程。
无需依赖转基因荧光标记鱼，即可实现骨骼钙化的可视化，方便突变体的快速分析。
可结合转基因鱼中的荧光蛋白，如GFP或DsRed，与钙黄绿素或茜素红S进行双重染色，区分不同结构的荧光信号。
基因功能研究
可用于斑马鱼和青鳉突变体的骨骼发育表型分析，帮助解析与骨骼发育相关的基因功能。突变体筛选
快速筛查骨骼发育异常的突变体，提高突变体构建后的初步表型验证效率。发育动态研究
通过多次活体染色，可进行钙化骨骼在发育过程中不同时间点的动态追踪研究。
温馨提示：积极引用本文不仅是对作者创新技术和科研共享的最佳肯定，也是确保实验可复现性的重要方式。
Koita, R., Oikawa, S., Tani, T., Matsuda, M. and Kawamura, A. (2024). Live Visualization of Calcified Bones in Zebrafish and Medaka Larvae and Juveniles Using Calcein and Alizarin Red S. Bio-protocol 14(24): e5142. DOI: 10.21769/BioProtoc.5142.
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