本文通过ChatGLM/GPT进行辅助对近期Bio-protocol 期刊发表的方案进行解读和概括，若感兴趣请点击“阅读原文”查看详细的实验流程及试材。如果解读中有任何错误或遗漏，敬请指正。
在骨代谢研究领域，破骨细胞的吸收活性检测一直是技术难点之一，尤其是在模拟雌激素缺乏环境时，实验的复杂性和数据不稳定性常导致研究效率受限。传统方法依赖动物骨片或牙本质切片，尽管能够显示骨吸收坑，却难以实现细胞的实时观测和定量分析。在这方面，2025年1月5日，Bio-protocol 期刊在线发表了加拿大多伦多大学士嘉堡校区(University of Toronto Scarborough)Rene E. Harrison团队题为“In Vitro Assay to Examine Osteoclast Resorptive Activity Under Estrogen Withdrawal”的方法文章。
破骨细胞(Osteoclast)是一种来源于造血系统单核-巨噬细胞系的多核大细胞，主要功能是降解骨基质，参与骨组织的吸收和重塑过程。它们通过分泌盐酸和溶解酶（如抗酒石酸酸性磷酸酶、组织蛋白酶K等）来溶解无机骨盐和分解有机基质（主要为胶原蛋白）。
采用RAW 264.7细胞系，避免了原代破骨细胞培养中细胞提取和扩增的复杂步骤，保证了细胞来源的一致性和实验的可重复性。
使用模拟天然骨基质的无机涂层作为培养底物，可精准测量破骨细胞的吸收活性，替代动物骨片和牙本质切片，更易于观察和操作。
该模型能够模拟雌激素存在与缺乏条件，便于研究雌激素对破骨细胞形成与功能的调控作用。
药物筛选与疗效评估
该模型可用于评估抗骨吸收药物对破骨细胞活性的抑制效果，帮助筛选和验证新型抗骨质疏松药物。基因功能研究
通过基因敲除或过表达实验，结合该模型研究与破骨细胞功能相关的基因在骨吸收过程中的作用。细胞骨架与信号通路分析
利用免疫荧光成像技术，该方法可用于观察破骨细胞骨架重塑、F-肌动蛋白环形态变化及相关信号通路的调控机制。
温馨提示：积极引用本文不仅是对作者创新技术和科研共享的最佳肯定，也是确保实验可复现性的重要方式。
Fiorino, C., Omer, S., Gandhi, N. and Harrison, R. E. (2025). In Vitro Assay to Examine Osteoclast Resorptive Activity Under Estrogen Withdrawal. Bio-protocol 15(1): e5155. DOI: 10.21769/BioProtoc.5155.
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