培养基,又称生长介质,是由人工配制,用于培养微生物、细胞、组织等,有利其生长繁殖或代谢物产生的的固态、半固态、液态混合营养基质或介质。培养基中含有提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,如碳源、氮源、无机盐、生长因子等,以及适宜的pH值和渗透压。
培养基在生物学研究中扮演着非常重要的角色。它不仅为微生物提供生长环境,还可用于分离、纯化、鉴定、计数微生物,以及进行药物筛选、基因工程等研究。下面,老司机将为你详细介绍实验室中常用的几种培养基及其配制方法。
(图片来源:Canva)
牛肉膏蛋白胨培养基(Nutrient Broth)
● 牛肉膏:3.0g
● 蛋白胨:10.0g
● NaCl:5.0g
● 琼脂粉:15-20g(用于固体培养基)
● ddH2O:加至1L
LB培养基
● 胰蛋白胨:10g
● 酵母粉:5g
● NaCl:10g
● 琼脂粉:15-20g(用于固体培养基)
● ddH2O:加至1L
LB培养基(含Amp)
● 胰蛋白胨:10g
● 酵母粉:5g
● NaCl:10g
● 琼脂粉:15-20g(用于固体培养基)
● ddH2O:加至1L
马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)
● 马铃薯提取物:200 g(通常使用新鲜马铃薯)
● 葡萄糖:20 g
● 琼脂粉:15-20 g(用于固体培养基)
● ddH2O:加至1L
配制方法:将新鲜马铃薯去皮切块,加入配方所需量蒸馏水煮沸20分钟,稍稍冷却后用双层纱布过滤,得到马铃薯浸出液。随后将葡萄糖和琼脂粉加入马铃薯浸出液中,加热溶解。pH调至5.6左右, 将配制好的培养基分装到三角瓶或试管中,121℃高压灭菌15分钟。
葡萄糖糖发酵管
● 蛋白胨:10g
● 酵母粉:5g
● 氯化钠:5g
● 磷酸氢二钾:2g
● 葡萄糖:10g
● 酚红指示剂:0.02g
● 琼脂:15g(用于半固体培养基)
● ddH2O:加至1L
SOB培养基
● 胰蛋白胨:20g
● 酵母粉:5g
● NaCl:0.5g
● ddH2O:加至1L
高氏1号培养基
● 可溶性淀粉:20g
● KNO₃:1g
● NaCl:0.5g
● K₂HPO₄·3H₂O:0.5g
● MgSO₄·7H₂O:0.5g
● FeSO₄·7H₂O:0.01g
● 琼脂:15-20g
● ddH2O:加至1L
马丁氏培养基
● 葡萄糖:10g
● 蛋白胨:5g
● KH₂PO₄:1g
● MgSO₄:0.5g
● 孟加拉红:0.33g (抑制细菌和放线菌)
● 链霉素:30mg (抑制细菌和放线菌)
● 琼脂:20g
● ddH2O:加至1L
明胶培养基
● 明胶:120g
● 牛肉膏:5g
● 蛋白胨:5g
● NaCl:5g
● ddH2O:加至1L
(图片来源:Canva)
在学实验中,我们经常还需要需要在培养基中添加抗生素,以筛选含有特定抗性基因的细菌。例如,在克隆实验中,为了筛选含有重组质粒的细菌,会在培养基中加入相应的抗生素。只有含有抗性基因的细菌才能在含有抗生素的培养基中生长。下面我们再来看看实验室中常用抗生素的配方:
氨苄青霉素(Ampicillin)
● 溶解性:易溶于水
● 母液浓度:100 mg/mL
● 工作浓度:50-100 μg/mL
配制方法:称取1g氨苄青霉素,加入10mL无菌水,充分溶解。分装成小份,-20℃保存。使用前,根据实验需要稀释至工作浓度。
卡那霉素(Kanamycin)
● 溶解性:易溶于水
● 母液浓度:50 mg/mL
● 工作浓度:25-50 μg/mL
配制方法:称取0.5g卡那霉素,加入10mL无菌水,充分溶解。分装成小份,-20℃保存。使用前,根据实验需要稀释至工作浓度。
氯霉素(Chloramphenicol)
● 溶解性:易溶于乙醇
● 母液浓度:34 mg/mL
● 工作浓度:25 μg/mL
配制方法:称取0.34g氯霉素,加入10mL无菌乙醇,充分溶解。分装成小份,-20℃避光保存。使用前,根据实验需要稀释至工作浓度。
四环素(Tetracycline)
● 溶解性:微溶于水,易溶于酸
● 母液浓度:12.5 mg/mL
● 工作浓度:10-50 μg/mL
配制方法:称取0.125g四环素,加入10mL无菌水或稀盐酸,充分溶解。分装成小份,-20℃避光保存。使用前,根据实验需要稀释至工作浓度。
需要注意的是,抗生素溶液在配制完毕后,均需要使用针头过滤器对其进行过滤。配制好的抗生素溶液并非永久有效,应注意保质期。
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