染料法：
SYBR Green I是最常用的染料之一。这种非特异性嵌入双链DNA的小分子染料，在游离状态下几乎不发出荧光，但当其结合到双链DNA上时荧光强度显著增加。 每个循环后，随着新合成的双链DNA数量增加，SYBR Green I结合的量也随之增加，因此可以通过检测荧光强度来衡量PCR产物的数量。 它的缺点是无法区分目标序列和其他非特异性扩增产物（如引物二聚体），因为染料会与所有双链DNA结合。
探针法通常使用的是水解探针（也称TaqMan探针）。这类探针是一段寡核苷酸，两端分别标记有报告基团（Reporter, R）和淬灭基团（Quencher, Q）。在完整的探针中，R发出的荧光被Q吸收，所以没有荧光信号。 探针在PCR过程中被酶切开，释放荧光信号。这种方式更特异，能准确检测目标序列，适合多重检测。但是，探针的设计和合成相对复杂，成本也较高。
[视频版本]
往期文章
手把手教学｜如何分析qPCR的数据
手把手教学｜荧光定量PCR全流程实验步骤和注意事项
手把手教学｜通用荧光定量PCR引物设计的原则和流程
exdrive.cn
公众号、视频号、知乎、Bilibili
抖音、西瓜、今日头条、小红书
内容同步
