一、酵母感受态细胞制备
(1) 将-80℃保存的酵母菌株在YPDA固体培养基平板上划线，30℃培养条件下倒置培养4-7d。
(2) 挑取单菌落至含3mLYPDA液体培养液中。
(3) 30℃培养，200rpm 震荡培养8h。
(4) 当菌液OD值约为0.3时，转移10uL菌液到含50mIYPDA培养液中。
(5) 30℃培养，200rpm震荡培养16-20h至OD值为015-0.3。
(6) 700g转速5min室温离心收集细胞。
(7) 将底部沉淀使用已预热至30℃的100mLYPDA中重悬酵母细胞。
(8) 30℃，200rpm，摇3-5h至OD值=0.6时。
(9) 5min室温离心收集细胞。
(10) 将底部沉淀在30mL无菌超纯水中重悬酵母细胞.
(11) 700g转速5min室温离心收集细胞。
(12) 将底部沉淀加入3mL的1.1XTE/LiAc重悬细胞。
(13) 将悬重悬细胞分成2管，6000g转速室温离心30s。
(15) 将底部沉淀加入500uL的1XTE/LiAc重悬酵母细胞，分装为100uL每管。
二、转化
（1）在干净的1.5 mL的离心管中并振荡混匀。
（2）每个离心管中加入100 µL的酵母感受态细胞，500 µL的PEG/LiAc溶液，加入两种质粒，并且将管中的混合物进行旋涡振荡，将其混匀。
（3）在30℃，220 rpm/min的摇床振荡培养30 min。
（4）往每个离心管中加70 µL的DMSO，并温和的上下颠倒混匀。将离心管在42℃水浴中热激40 min（每隔10 min摇匀1次）。
（5）取出离心管，在冰上静置2 min。
（6）吸取100 µL并涂布在相应的二缺固体培养基上，培养3-4天，待菌长好后，挑单菌落于10ulYPDA液体培养基中，30℃培养过夜。
互作验证：
取过夜培养的菌液涂布于四缺平板上，将培养皿置于30℃恒温培养箱中培养，观察是否生长与颜色变化。
注意事项：
（1）检测感受态细胞效率，标准操作规范。
（2）注意质粒使用量，检查仪器状态。
（3）配制新鲜培养基，并做对照转化，添加抑制剂，同时增设严格的对照组防止自激活。
（4）应挑选大的、新鲜的菌株克隆进行培养。
本文作者是"我叫一休"同学，在获得授权后，实验老司机将本文发表于公众号。
文稿：我叫一休
校对：煲仔饭
素材：Canva
参考资料：
https://doi.org/10.3390/ijms10062763
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